抗體保存得當(dāng)與否,,直接決定了抗體的活性和使用效果,!如果抗體保存得當(dāng),,大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。
請謹(jǐn)記,!無論何時
請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體,!
1. 收到抗體后請務(wù)必在12000rpm離心1-5分鐘后再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul,請延長離心時間至5分鐘,,以保證全部抗體均離心下來),!
2. 比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20℃ or -80℃ 。
- 對絕大多數(shù)抗體來說,,保存在-20℃是*足夠了,。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會有更多的好處!
- 分裝可以zui大程度的降低反復(fù)凍融對抗體活性的損害,,同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性,。
- 分裝的量以一次實驗用完為好,zui少不能少于10ul每份,。因為分裝體積越小,,抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響
- 復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,,避免再凍起來,!
- 抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完,在4℃ 盡量不要超過1天,。
- 避免將抗體保存在自動除霜冰箱中,。盡量將抗體保存在冰箱里層,而不是門上
3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1-2周對抗體活性是沒有影響的,。
如果抗體很快(1-2周)會使用,,推薦在4℃保存,這是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害,。如果要長期保存則是在-20℃ or -80℃,。zui關(guān)鍵的一點是要根據(jù)說明書推薦的方式來正確的保存抗體,!
但是,腹水形式的產(chǎn)品請在收到后立即凍起來,!因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶,,長期在4oC保存會導(dǎo)致抗體的降解!
4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件:一般的運(yùn)輸過程需要1-2周的時間,,所以是在4℃的條件下來完成的,。
4℃運(yùn)輸zui主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害(如果使用干冰運(yùn)輸,那么收到時抗體是凍起來的,,為了分裝就需要解凍,。這就多了一次凍融的過程)。所以運(yùn)輸過程中避免干冰運(yùn)輸,!
特殊抗體的保存條件:
- 酶聯(lián)抗體:永遠(yuǎn)保存在4℃,避免凍起來,。否則會導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失
- 偶聯(lián)抗體:所有偶聯(lián)抗體都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光4℃保存,。尤其是熒光抗體,對光極為敏感,,因此在所有的實驗階段也是要避光操作的,!
- IgG3的同型對照:永遠(yuǎn)保存在4℃,避免凍起來,。因為如果出現(xiàn)凍融過程,,該抗體非常容易形成多聚體
無論是保存還是運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融,!
反復(fù)凍融會導(dǎo)致抗體變性,,導(dǎo)致多聚體形成,從而降低抗體的結(jié)合能力,!
抗體保存其它相關(guān)信息:
關(guān)于加入甘油保存:
有些人會加50%的甘油到抗體中來避免反復(fù)凍融,,甘油在-20℃ 會降低冰點。這對很多抗體可能是可行的,。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存,,因為這已經(jīng)超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體的話,,請謹(jǐn)慎注意無菌操作,,避免污染!
關(guān)于蛋白保護(hù)劑:
蛋白在高濃度時更不容易降解(1 mg/ml 或者更高),,這就是為什么在抗體中加入BSA之類作為穩(wěn)定劑的原因了,;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失,。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話,,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,,因為這些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。
關(guān)于*(sodium azide)的使用:
為了防止微生物污染,,*經(jīng)常被加入到抗體中(終濃度0.02% (w/v)),。
在下述情況中不能使用*:
- 如果抗體用于染色或處理活細(xì)胞,用于體內(nèi)研究:
*在抵抗微生物的同時,,對其它大部分有機(jī)物也是有毒的,,因為它阻斷了線粒體的cytochrome electron transport system.
- 要偶聯(lián)帶有氨基基團(tuán)的抗體:
*會干擾任何含有氨基基團(tuán)的偶聯(lián),因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前,,應(yīng)將*去除,。偶聯(lián)后的抗體可以加入*保存,但是濃度只能是0.01%,。對于需要偶聯(lián)的抗體,,thimerosal (merthiolate)可以替代*作為保護(hù)劑!
注:*的去除方式:
可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除,!IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); *的分子量只有65Da,。使用cut off 14kDa的濾膜即可將*從抗體中去除