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技術(shù)文章

Taqman-LNA探針的合成

點擊次數(shù):6421 發(fā)布時間:2009-3-16

什么是LNA
    LNA 是新型的核酸類似物,,它包含了2'-氧4' 碳亞甲基連接,這個連接限制了呋喃核糖環(huán)的靈活性,,因而將其結(jié)構(gòu)鎖定成一個剛性的雙環(huán)模式,,因此而提高雜交效率和*的穩(wěn)定性。

LNA 熒光探針優(yōu)點:

1.增強熱穩(wěn)定性和雜交的特異性
   對實時定量PCR探針提出LNA化學(xué)產(chǎn)品增強雙鏈體的熱穩(wěn)定性,,同時加強對目標(biāo)序列雜交的特異性,。因此,由非所需激活的熒光背景將大量減少,,從而使信號對背景噪音的比例增大,。

   LNA 單分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)決定了其探針與目標(biāo)序列雜交后的穩(wěn)定性,與普通的DNA熒光探針相比,,其雙鏈在相同的鹽溶液中,,每增加一個單體LNA分子將導(dǎo)致其熔點提升8°C,。強化后的雜交性能可以顯著的擴大實驗檢測的環(huán)境限制,,同時允許在單試管中進行更復(fù)雜的試驗??梢酝ㄟ^調(diào)整LNA堿基在探針中的位置來調(diào)節(jié)*熔點(Tm)和雜交的特異性,。

2.更易及靈活的探針設(shè)計來檢測有問題的目標(biāo)序列

   由于LNA 強化的雜交特征和對熔點溫度的影響,含有LNA的實時定量PCR探針,,長度較短,,可以增加設(shè)計的靈活性,同時附和檢測設(shè)計的指南,。因此普通DNA探針某些設(shè)計的局限或無法解決的問題都可被減少或消除,。
例如, 含大量AT的實時定量PCR探針通常需要30堿基以上(有時超過40堿基)來達到擴增設(shè)計的指南,但是可能效果較差,。LNA熒光探針的應(yīng)用可靈活選擇LNA的位置,,以達到高特異性的設(shè)計,短的探針可以很有效的工作,,甚至短到13到20個堿基,。

3.適用于多種實時定量PCR 系統(tǒng)
   LNA 熒光探針適用于多種實時定量PCR 系統(tǒng),這基于染料和設(shè)備的激發(fā)/發(fā)射的波長,。這為您提供在固定的周期實驗環(huán)境下自由的選擇儀器與試劑系統(tǒng)的組合,。這無需額外的資本投入。

 

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