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技術文章
IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測定
點擊次數(shù)：1719 發(fā)布時間：2011-5-23
IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測定
IL-4能阻斷IFN對L929細胞的保護作用,，其拮抗程度與IL-4濃度相關，據(jù)此可通過對L929細胞保護作用的抑制率來反映樣本中IL-4的含量。
（1）,、取生長良好的L929細胞傾去培養(yǎng)液,，加入0．25％胰酶消化后,，充分洗滌細胞,，調整細胞濃度至1×105—3×105／mL，每孔加100uL,，37℃,，5％C02溫箱中培養(yǎng)24h。
（2）,、采用9—10日齡雞胚,，制備成纖維細胞單層培養(yǎng)，接種適量VSV病毒,。當細胞病變達+++—++++時,，收獲病毒，并進行病毒TCID50測定,。
（3）,、將待檢上清和rlL-4分別與4U／mL IFN混合，在L929細胞培養(yǎng)內加100uL,。37~C,，5％C02溫箱中孵育24h。
（4）,、VSV攻擊：每孔加100uL病毒懸液,，含200TCID；置37℃,，5％C02溫箱培養(yǎng)48h,，待病毒對照孔病變達+++—++++，細胞對照正常時，測定結果,。
（5）,、將培養(yǎng)液全部倒出，用Hanks液洗3次,；每孔加入100uL0．5％結晶紫染色液,，染10—20rain棄去,，Hanks液洗3次,，加入95％酒精。放小型振蕩器上振搖15min左右,，待細胞內染料*溶解,。用分光光度計540nm波長測OD值，以準確客觀地反映細胞存活數(shù)量,。
（6）,、注意事項：
①L929細胞在營養(yǎng)條件不良時，可呈圓形漂浮狀,，此時更換培養(yǎng)液可使其恢復為梭形貼壁細胞,；
②L929細胞要均勻分散于培養(yǎng)板孔中，否則可能造成某個部位細胞過密,，另一部分過稀,，將影響細胞單層的形成。
（1）,、取生長良好的L929細胞傾去培養(yǎng)液,，加入0．25％胰酶消化后,，充分洗滌細胞,，調整細胞濃度至1×105—3×105／mL，每孔加100uL,，37℃,，5％C02溫箱中培養(yǎng)24h。
（2）,、采用9—10日齡雞胚,，制備成纖維細胞單層培養(yǎng)，接種適量VSV病毒,。當細胞病變達+++—++++時,，收獲病毒，并進行病毒TCID50測定,。
（3）,、將待檢上清和rlL-4分別與4U／mL IFN混合，在L929細胞培養(yǎng)內加100uL,。37~C,，5％C02溫箱中孵育24h。
（4）,、VSV攻擊：每孔加100uL病毒懸液,，含200TCID；置37℃,，5％C02溫箱培養(yǎng)48h,，待病毒對照孔病變達+++—++++，細胞對照正常時，測定結果,。
（5）,、將培養(yǎng)液全部倒出，用Hanks液洗3次,；每孔加入100uL0．5％結晶紫染色液,，染10—20rain棄去,，Hanks液洗3次,，加入95％酒精。放小型振蕩器上振搖15min左右,，待細胞內染料*溶解,。用分光光度計540nm波長測OD值，以準確客觀地反映細胞存活數(shù)量,。
（6）,、注意事項：
①L929細胞在營養(yǎng)條件不良時，可呈圓形漂浮狀,，此時更換培養(yǎng)液可使其恢復為梭形貼壁細胞,；
②L929細胞要均勻分散于培養(yǎng)板孔中，否則可能造成某個部位細胞過密,，另一部分過稀,，將影響細胞單層的形成。