會(huì)員.png)
QQ交談
MSN交談
您所在位置：請(qǐng)輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
郵編：201100
聯(lián)系人：陳
電話：021-64133189
傳真：021-64129208
手機(jī)：13788995069
留言：發(fā)送留言
個(gè)性化：www.runwelltac.com
網(wǎng)址：www.runwelltac.com
商鋪：http://sorrent.com.cn/st111352/
無血清培養(yǎng)基的使用方法
點(diǎn)擊次數(shù)：1689 發(fā)布時(shí)間：2017-8-23
無血清培養(yǎng)基的使用方法
目前,，血清仍是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長狀況不良時(shí),，常常會(huì)先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),，待細(xì)胞生長旺盛以后，再換成無血清培養(yǎng)液,。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個(gè)適應(yīng)過程,，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%,，3%,，1%，直至無血清培養(yǎng),。在降低過程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化，是否有部分細(xì)胞死亡,，存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等,。在實(shí)驗(yàn)后這些細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留,，很少有細(xì)胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前,，要留有種子細(xì)胞,，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化,。
為了使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng),，關(guān)鍵的是使所培養(yǎng)細(xì)胞：
1.處于對(duì)數(shù)生長中期
2.>90% 活細(xì)胞率
3.適應(yīng)時(shí)以較高的起始細(xì)胞接種
細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方法
1.直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中。
一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基,。對(duì)于直接適應(yīng),，接種細(xì)胞密度應(yīng)該:2.5×105~3.5×105細(xì)胞/ml。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml時(shí),，傳代培養(yǎng)細(xì)胞,。當(dāng)細(xì)胞密度在培養(yǎng)4到7天后達(dá)到2×106~4×106細(xì)胞/ml時(shí)，細(xì)胞*適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基,。每隔3~5天,，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml，細(xì)胞活率在90％時(shí),，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng),。
2.連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中，與直接適應(yīng)相比較,，連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些,。
（1）以2倍正常接種密度接種生長活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基：25％SFM 混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng),。
（2）當(dāng)細(xì)胞密度>5×105細(xì)胞/ml時(shí),，以2×105到3×105細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng),。
（3）以2×106到3×106細(xì)胞/ml細(xì)胞密度,，25％有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。
（4）當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml（接種后4到6天）,，在100％SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng),。
（5）每隔3到5天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml,，細(xì)胞活率在90％時(shí),，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物,，直到每一次細(xì)胞適應(yīng)了新的混合培養(yǎng)基,。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進(jìn)行幾次傳代,。
在適應(yīng)過程中,，不要讓細(xì)胞生長過度,。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意,，與有血清培養(yǎng)基相比,，大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì)，因而更易于受外界因素的影響,。