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技術(shù)文章
alamarBlue的用法
點擊次數(shù)：2603 發(fā)布時間：2010-12-3
alamarBlue的用法
| 貼壁細胞和非貼壁細胞都適用,。所有操作在無菌條件下進行。避免污染細胞,，因為微生物污染也會還原alamarBlueTM,，培養(yǎng)基中應(yīng)添加抗生素如青霉素G（1U/ml）、兩性霉素B（amphotericin B,，0.0025ug/ml）,。 氧化還原指示劑是pH敏感的,，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對比色法檢測無影響,，但是會淬滅部分熒光,；因此，用熒光法檢測時對照溶液中需添加10％BSA,。酚紅對檢測也有一定影響,，結(jié)果會上調(diào)0.03%。一般來說,，應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基,，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle,。 在特殊系統(tǒng)中使用時,，細胞密度、孵育時間,、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測的細胞,，以優(yōu)化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上,， 1、 細胞培養(yǎng)：RPMI培養(yǎng)基,，添加HEPES,、10％胎牛血清、1％谷氨酸鹽,、適當(dāng)?shù)目股兀?/div> 2,、 細胞覆蓋率達80％時，用胰酶消化鋪于微孔板中,，密度在每孔825~80000個細胞,。 3、 1個小時后,，加入alamarBlueTM,，37℃ 5％CO2培養(yǎng) 4、 到預(yù)定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意：若檢測的還原度不夠,，可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測,，這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細胞周期的影響（如roscovitine，一種抗癌藥,、周期蛋白激酶抑制劑）,，胰酶消化細胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上,，37℃ 5％CO2培養(yǎng)2天,；除去之前的培養(yǎng)基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養(yǎng)基,，在預(yù)定的時間點檢測其還原度。 |
| 貼壁細胞和非貼壁細胞都適用,。所有操作在無菌條件下進行,。避免污染細胞，因為微生物污染也會還原alamarBlueTM,，培養(yǎng)基中應(yīng)添加抗生素如青霉素G（1U/ml）,、兩性霉素B（amphotericin B，0.0025ug/ml）,。 氧化還原指示劑是pH敏感的,，推薦使用磷酸緩沖液,。10％胎牛血清對比色法檢測無影響,，但是會淬滅部分熒光；因此,，用熒光法檢測時對照溶液中需添加10％BSA,。酚紅對檢測也有一定影響，結(jié)果會上調(diào)0.03%,。一般來說,，應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基，如RPMI1640,、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle,。 在特殊系統(tǒng)中使用時，細胞密度,、孵育時間,、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測的細胞,，以優(yōu)化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上,， 1、 細胞培養(yǎng)：RPMI培養(yǎng)基,，添加HEPES,、10％胎牛血清、1％谷氨酸鹽,、適當(dāng)?shù)目股兀?/div> 2,、 細胞覆蓋率達80％時，用胰酶消化鋪于微孔板中,，密度在每孔825~80000個細胞,。 3、 1個小時后,，加入alamarBlueTM,，37℃ 5％CO2培養(yǎng) 4,、 到預(yù)定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意：若檢測的還原度不夠，可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測,，這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細胞周期的影響（如roscovitine,，一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑）,，胰酶消化細胞,、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上，37℃ 5％CO2培養(yǎng)2天,；除去之前的培養(yǎng)基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養(yǎng)基,，在預(yù)定的時間點檢測其還原度。 |
| 貼壁細胞和非貼壁細胞都適用,。所有操作在無菌條件下進行,。避免污染細胞，因為微生物污染也會還原alamarBlueTM,，培養(yǎng)基中應(yīng)添加抗生素如青霉素G（1U/ml）,、兩性霉素B（amphotericin B，0.0025ug/ml）,。 氧化還原指示劑是pH敏感的,，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對比色法檢測無影響,，但是會淬滅部分熒光,；因此,，用熒光法檢測時對照溶液中需添加10％BSA,。酚紅對檢測也有一定影響，結(jié)果會上調(diào)0.03%,。一般來說,，應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基，如RPMI1640,、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle,。 在特殊系統(tǒng)中使用時，細胞密度,、孵育時間,、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測的細胞,，以優(yōu)化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上,， 1、 細胞培養(yǎng)：RPMI培養(yǎng)基,，添加HEPES,、10％胎牛血清,、1％谷氨酸鹽、適當(dāng)?shù)目股兀?/div> 2,、 細胞覆蓋率達80％時,，用胰酶消化鋪于微孔板中，密度在每孔825~80000個細胞,。 3,、 1個小時后，加入alamarBlueTM,，37℃ 5％CO2培養(yǎng) 4,、 到預(yù)定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意：若檢測的還原度不夠，可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測,，這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細胞周期的影響（如roscovitine,，一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑）,，胰酶消化細胞,、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上，37℃ 5％CO2培養(yǎng)2天,；除去之前的培養(yǎng)基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養(yǎng)基,，在預(yù)定的時間點檢測其還原度。 |
氧化還原指示劑是pH敏感的,，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對比色法檢測無影響,，但是會淬滅部分熒光,；因此，用熒光法檢測時對照溶液中需添加10％BSA,。酚紅對檢測也有一定影響,，結(jié)果會上調(diào)0.03%。一般來說,，應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基,，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle。
在特殊系統(tǒng)中使用時,，細胞密度,、孵育時間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化,。
收集需檢測的細胞,，以優(yōu)化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上，
1,、 細胞培養(yǎng)：RPMI培養(yǎng)基,，添加HEPES、10％胎牛血清,、1％谷氨酸鹽,、適當(dāng)?shù)目股兀?/div>
2、 細胞覆蓋率達80％時,，用胰酶消化鋪于微孔板中,，密度在每孔825~80000個細胞。
3,、 1個小時后,，加入alamarBlueTM，37℃ 5％CO2培養(yǎng)
4,、 到預(yù)定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況
注意：若檢測的還原度不夠,，可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測，這是該方法的一大*之處
研究特殊藥物對細胞周期的影響（如roscovitine,，一種抗癌藥,、周期蛋白激酶抑制劑），胰酶消化細胞,、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上,，37℃ 5％CO2培養(yǎng)2天；除去之前的培養(yǎng)基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養(yǎng)基,，在預(yù)定的時間點檢測其還原度,。
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