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培養(yǎng)基傳代細(xì)胞的制備操作方法
點(diǎn)擊次數(shù)：2104 發(fā)布時間：2016-12-13
（一）原理
體外培養(yǎng)基的原代細(xì)胞或細(xì)胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代,，以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株或得到大量的同種細(xì)胞,，并維持細(xì)胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細(xì)胞形成單層匯合以后,，由于密度過大生存空間不足而引起營養(yǎng)枯竭,，將培養(yǎng)的細(xì)胞分散,，從容器中取出,，以1:2或l:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進(jìn)行培養(yǎng),，即為傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,，與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中,，細(xì)胞培增3～6次,。細(xì)胞傳代后，一般經(jīng)過三個階段：游離期,、指數(shù)增生期和停止期,。
常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度，即細(xì)胞群的分裂相數(shù)／100個細(xì)胞,。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％,，腫瘤細(xì)胞可達(dá)3～5％。細(xì)胞接種2～3天分裂增殖旺盛,，是活力時期,，稱指數(shù)增生期（對數(shù)生長期），適宜進(jìn)行各種試驗,。
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1．將長成單層的原代培養(yǎng)細(xì)胞或HeLa細(xì)胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出，在超凈工作臺中倒掉瓶內(nèi)的培養(yǎng)基液,，加入少許消化液,。（以液面蓋住細(xì)胞為宜），靜置5～10分鐘。
2．在倒置鏡下觀察被消化的細(xì)胞,，如果細(xì)胞變園,，相互之間不再連接成片，這時應(yīng)立即在超凈臺中將消化液倒掉,，加入3～5ml新鮮培養(yǎng)液,，吹打，制成細(xì)胞懸液,。
3．將細(xì)胞懸液吸出2ml左右,，加到另一個培養(yǎng)瓶中并向每個瓶中分別加3ml左右培養(yǎng)液，蓋好瓶塞,，送回二氧化碳培養(yǎng)箱中,，繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。
?。ㄈ┙Y(jié)果
一般情況,，傳代后的細(xì)胞在2小時左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上，2～4天就可在瓶內(nèi)形成單層,，需要再次進(jìn)行傳代,。