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常用培養(yǎng)基的制備
點(diǎn)擊次數(shù)：2036 發(fā)布時(shí)間：2016-11-16
培養(yǎng)基（Medium）是供微生物,、植物和動(dòng)物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,，一般都含有碳水化合物,、含氮物質(zhì),、無機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等,。以下介紹培養(yǎng)基的制備流程：
一,、配料
按培養(yǎng)基處方準(zhǔn)確稱取各種成分,，先在三角燒瓶中加入少量蒸餾水，再加入各種成分,，以防蛋白胨等粘附于瓶底,，然后再以剩余的水沖洗瓶壁。
二,、溶化
將各種成分混勻于水中,，以流通蒸氣溶化半小時(shí)，如在電爐上溶化應(yīng)隨時(shí)攪拌,，如有瓊脂成分時(shí)更應(yīng)注意防止外溢,。溶化完畢，補(bǔ)足失去的水分,。
三,、矯正pH
1.pH測定
取與標(biāo)準(zhǔn)管同口徑的試管（通常用華氏試管）3支，于第1,、3管各加入欲測定pH的的培養(yǎng)基5ml,，并于管中加入0.2g／L的酚紅0.25ml作為測定管，混勻,；于第2管加入蒸餾水5ml,，第4管為pH標(biāo)準(zhǔn)比色管。
2.pH的校正
若測定管過酸或過堿可用0.1mol／L氫氧化鈉或0.1mol／L鹽酸溶液矯正,，直至顏色與標(biāo)準(zhǔn)管相同為止,，加堿或加酸時(shí)要緩慢，每加1滴后要充分混勻,，比色后再加第2滴（有時(shí)僅加半滴）準(zhǔn)確記錄加入的量,。
3.計(jì)算
設(shè)5ml培養(yǎng)基矯正pH至7.4時(shí)需0.1mol／L氫氧化鈉0.15ml，現(xiàn)有培養(yǎng)基4990ml,，需加氫氧化鈉的量可按下列方法計(jì)算：5∶4990＝0.15∶X
X＝0.15×4990/5＝149.7（ml）
如將此0.1mol／L的氫氧化鈉改用1mol／L的氫氧化鈉時(shí),，則需14.9ml即可醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集|整理。
四,、過濾澄清
培養(yǎng)基配制后一般都有沉渣或混濁出現(xiàn),，需過濾成清晰透明后方可使用,，常用的過濾方法如下：
1.液體培養(yǎng)基
液體培養(yǎng)基必須清晰，以便觀察細(xì)菌的生長情況,，常用濾紙過濾,，亦可在加熱前加入用水稀釋的雞蛋白（1000ml培養(yǎng)基用1個(gè)雞蛋白）在100℃加熱后保持60～70℃,40～60分鐘，使其不溶性物質(zhì)附于凝固的蛋白上而沉淀,，然后再用虹吸法吸出上清液或以濾紙過濾,。
2.固體培養(yǎng)基
如系瓊脂培養(yǎng)基，于加熱融化后需趁熱以絨布或兩層紗布中夾脫脂棉過濾,；亦可用自然沉淀法,，即將瓊脂培養(yǎng)基盛人鋁鍋或廣口搪瓷容器內(nèi)，以高壓（103.43kPa）蒸汽融化15分鐘后,，靜置高壓鍋內(nèi),，次日將瓊脂傾出，用刀將底部沉渣切去,，再融化即可收清晰的瓊脂培養(yǎng)基,。
五、分裝
1.根據(jù)需要將培養(yǎng)基分裝于不同容量的三角燒瓶,、試管中,。分裝的量不宜超過容器的2／3以免滅菌時(shí)外溢。
2.瓊脂斜面分裝量為試管容量的1／5,，滅菌后須趁熱放置成斜面,，斜面長約為試管長的2／3
3.半固體培養(yǎng)基分裝量約為試管長的1／3，滅菌后直立凝固待用,。
4.高層瓊脂分裝量約為試管的1／3,，滅菌后趁熱直立，待冷后凝固待用,。
5.液體培養(yǎng)基分裝于試管中,，約是試管長度的1／3.
6.瓊脂平板：將滅菌（或加熱融化）后的培養(yǎng)基冷至50℃左右，以無菌手續(xù)傾人滅菌平皿內(nèi),，內(nèi)徑9cm的平皿傾注培養(yǎng)基約13～15ml,，輕搖平皿底，使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部,，待凝固后即成,，傾注培養(yǎng)基時(shí)，切勿將皿蓋全部啟開,，以免空氣中塵埃及細(xì)菌落入,。
新制成的平板培養(yǎng)基（簡稱平板），表面水分較多，不利于細(xì)菌的分離,，通常應(yīng)將平皿倒扣擱置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約30分鐘待平板平面干燥后使用,。
六、滅菌
不同成分,、性質(zhì)的培養(yǎng)基，可采用不同的滅菌方法,。高壓蒸汽滅菌法：高壓滅菌的溫度與時(shí)間隨培養(yǎng)基的種類及數(shù)量的不同有所差別,，
一般培養(yǎng)基少量分裝時(shí)高壓（103.43kPa）滅菌15分鐘即可，培養(yǎng)基分裝量較大時(shí),，可高壓（103.43kPa）滅菌30分鐘,，含糖的培養(yǎng)基高壓（55.16kPa）滅菌15分鐘。以免糖類被破壞,。
七,、檢定
每批培養(yǎng)基制成后須經(jīng)檢定方可使用，檢定時(shí)將培養(yǎng)基放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)后,，證明無菌,，同時(shí)用已知菌種檢查在此培養(yǎng)基上生長繁殖及生化反應(yīng)情況，符合要求者方可使用,。
八,、保存
制好的培養(yǎng)基，不宜保存過久,，以少量勤做為宜,。每批應(yīng)注明名稱，分裝量,，制作日期等,，放在4℃冰箱內(nèi)備用。