色譜是一種分離分析手段,分離是核心,,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟,。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,,分析速度快等,。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁,、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹(shù)脂),、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,,柱效理論值可達(dá)5~16萬(wàn)/米,。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對(duì)于同系物分析,,只要500即可,;對(duì)于較難分離物質(zhì)對(duì)則可采用高達(dá)2萬(wàn)的柱子,因此一般10~30cm左右的柱長(zhǎng)就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要,。 在選擇色譜柱規(guī)格時(shí)應(yīng)考慮下列因素:① 色譜柱內(nèi)徑:樣品的上樣要與色譜柱的交叉截面面積相對(duì)稱,,要選擇色譜柱的內(nèi)徑要適合于樣品的上樣量。② 填料的粒徑:越小的粒徑具有越高的柱效,,但是價(jià)格更高,,并且?guī)?lái)更高的柱壓,要求設(shè)備的硬件具備更高的壓力耐受性,。在被測(cè)組分的色譜峰與其它色譜峰非??拷鼤r(shí),就需要更高的柱效,,此時(shí)較小粒徑的色譜填料就顯得非常有用,。相反,越大的粒徑則柱效越低,,但價(jià)格也相對(duì)較低,,同時(shí)對(duì)設(shè)備的要求也不高。③ 色譜柱長(zhǎng)度:越長(zhǎng)的色譜柱具有越高的柱效和更高的樣品承載量,,但是柱壓將會(huì)更高,,同時(shí)分離時(shí)間可能會(huì)更長(zhǎng)