通常，一根色譜柱在分析數(shù)千個樣品之后性能仍然保持良好,，但也有的色譜柱僅分析不多的樣品后幾乎就報廢了,。影響色譜柱壽命和其它問題的因素很多，而有些因素是操作者很難控制的,，如果被分析的樣品(如分析生物樣品),，怎么凈化樣品也是“臟"的，對于色譜柱的影響是非常大的,。然而采取下列措施后,，在多數(shù)情況下總能夠人為地減少色譜柱上故障，達(dá)到延長壽命的目的,。色譜柱預(yù)防及維護(hù)—避免高壓沖擊 一般色譜柱都能經(jīng)得起高壓,，但經(jīng)不起突然變化的高壓沖擊。引起高壓突然沖擊,，主要是因樣品閥的緩慢轉(zhuǎn)動,、泵起動快、柱切換操作等,。轉(zhuǎn)動六通進(jìn)樣閥時從泵到柱的液流會瞬時切斷,。在閥的泵側(cè)壓力升高，在閥的柱側(cè)壓力降低(變化超過20%),。閥轉(zhuǎn)到底后壓力突然沖擊一下恢復(fù)正常,。手動進(jìn)樣閥的變化不大,，自動進(jìn)樣閥比較慢,，可能造成壓力沖擊，可用氦氣代替空氣驅(qū)動進(jìn)樣閥,。因氮壓縮系數(shù)小,。另外泵起動不應(yīng)過快，可分步操作,。如用3mL/min流速,，先從lmL/min到2mL/min，然后再3mL/min,，每個間隔應(yīng)大于20s,。柱切換技術(shù)的應(yīng)用也很廣泛，切換過程中在色譜柱的入口處壓力在零到很大數(shù)字之間變化,，會很快使柱報廢,。色譜柱預(yù)防及維護(hù)—分離條件 多數(shù)色譜柱有很寬的試驗條件范圍,，但具體應(yīng)用又受到限制，主要是pH值,、柱溫和流動相的選擇,。硅膠為基質(zhì)的鍵合相要求PH在2.5～7之間，pH的流動相能“溶解"硅膠,，使鍵合相流失,。結(jié)果非堿性組分的保留不斷減少，堿性組分的保留增加,，引起堿性組分峰變寬,。如果一定要用高或低pH的流動相，可加預(yù)柱(飽和柱),。預(yù)柱裝在泵和進(jìn)樣閥之間,，用分析柱相同的填料填裝，或者用普通硅膠,。硅膠飽和了流動相,，減少了分析柱填料的損失。預(yù)柱不要求柱效高,，用價格低的一般硅膠疏松地填裝,，按期檢查硅膠的溶解情況。用預(yù)柱也有不利的影響,，即新流動相難以平衡,，保留時間不穩(wěn)定或穩(wěn)定慢。使用了預(yù)柱一定要加流路過濾器,，以防止硅膠微粒引起的麻煩,。以硅膠為基質(zhì)的柱和陰離子交換柱超過60℃后，會增加對流動相中化學(xué)物質(zhì)的吸附,。在高溫下用小顆粒柱引起柱床塌陷,，降低柱效，改變峰形,。在40℃以上使用3μm柱,，70℃以上使用5μm柱，會使值降低50%,。色譜柱預(yù)防及維護(hù)—加流路過濾器和保護(hù)柱 流路過濾器緊靠進(jìn)樣閥后面,，位于分析柱前。0.5μm燒結(jié)不銹鋼片夾在死體積很小的套子中,，擋住來源于樣品和進(jìn)樣閥墊圈的微粒入柱,。因為每個樣品都過濾既費事又帶來誤差，樣品量少過濾更困難,，因此流路上裝過濾器是比較省事的辦法,。也可以在流路加上保護(hù)柱,，放在流路過濾器和分析柱之間，或者代替流路過濾器,。保護(hù)柱的使命是收集阻塞色譜柱進(jìn)口的來自樣品的化學(xué)“垃圾",。這種垃圾zui終降低柱效能。保護(hù)柱是消耗品,，分析50～100個比較臟的樣品之后就要調(diào)換新的,。保護(hù)柱應(yīng)該是小體積，用分析柱的同種填料填裝,。保護(hù)柱使用得當(dāng),，對分離無影響，好像未裝保護(hù)柱一樣,。有些廠商的商品將保護(hù)柱和流路過濾器連在一個單元內(nèi),，使用起來非常方便。自己填裝保護(hù)柱都是用短柱,、不超過3cm長,，內(nèi)徑2～3mm，用較大粒度的填粒(15～20μm)干法填裝,，會使分析柱效略微有所降低,。色譜柱預(yù)防及維護(hù)—用強溶劑定期沖洗色譜柱 每次工作結(jié)束，用強溶劑沖洗柱是良好的習(xí)慣,?？捎眉状肌⒁译鏇_反相柱,，沖去留在柱上的強吸附組分,。用甲醇水為流動相時也應(yīng)沖洗。沖洗的程序在以下章節(jié)中介紹,。柱頭的燒結(jié)不銹鋼濾片,，要求平整，死體積小,，孔徑適當(dāng)(2～5μm),。過濾片選擇不好會改變色譜峰形,，增加阻力或起不到阻擋污染物的作用(填料很快變色),。色譜柱預(yù)防及維護(hù)—凈化樣品 用溶劑溶解的樣品，多數(shù)組分在一定的時間內(nèi)能*從柱中流出來,，不會造成危害,。有些樣品可能含有微粒物質(zhì)，樣品中的某種組分(如蛋白質(zhì))在柱頭上沉積下來,，組分在固定相上保留很強,，溶劑帶走柱填料等,，這些都會造成柱效能下降或?qū)χ鶋勖挠绊懀斜匾扇〈胧┓乐怪儔摹? 如在光線照射下觀察樣品是渾濁的或帶有乳白色,，進(jìn)樣前必須要過濾．雖然流路上裝有過濾器和保護(hù)柱,，但不能代替樣品的前處理，樣品中過多的微粒會使過濾器和保護(hù)柱超載,，很快阻塞,，或者微粒進(jìn)入分析柱，所以在進(jìn)樣前必須過濾樣品,。 若懷疑樣品與流動相混合有沉淀而對色譜柱有阻塞,，應(yīng)先試驗一下，看樣品溶液加入流動相中有無變渾或乳白色出現(xiàn),。如果進(jìn)樣后壓力突然增加而后又慢慢減小,，表明樣品中有微粒或發(fā)生沉淀,。如有沉淀要設(shè)法改變分離條件,，包括換樣品溶劑和流動相或處理樣品去掉不溶物質(zhì)。應(yīng)盡量用小體積的樣品,。 有些樣品能很強地吸附在柱填料上,，這樣會降低塔板數(shù)，改變樣品的保留物質(zhì)外,，還要加保護(hù)柱,，定期清洗色譜柱。有時因為疏忽,，用對柱有害的溶劑溶解樣品,，比如用6mol/L的氫氧化鈉溶解樣品，這樣的樣品只要進(jìn)50～100μL到硅膠基質(zhì)柱中,，硅膠就很快溶解而使柱報廢,。在這種情況下，應(yīng)立即中和樣品,，或除去原溶劑中的有害成分,。 綜上所述，如何保護(hù)良好的柱性能與柱壽命：1.認(rèn)真閱讀色譜柱使用說明書,；2.使用填充良好的色譜柱,；3.盡量減少壓力波動，避免機械及熱沖擊,；4.使用保護(hù)柱及在線過濾器,；5.經(jīng)常以強溶劑沖洗色譜柱；6.充分過濾樣品及流動相,，盡量避免雜質(zhì)微粒與強保留成分,；7.用穩(wěn)定的固定相(C18zui穩(wěn)定);8.在中等pH值操作時(6～8),，用有機緩沖溶液；9.色譜柱使用溫度小于40℃,；10.硅膠基質(zhì)的色譜柱,，應(yīng)保持流動相的pH值范圍在3.0～8.0；11.在水流動相與緩沖溶液中加200ppm的疊氮鈉,；12.流動相中含有緩沖溶液,，應(yīng)注意用95：5的水及有機溶劑過濾，有機溶劑不能低于5%,；13.貯存時,，沖洗掉鹽和緩沖液，用純有機溶劑流動相保存,。
