液相色譜法是20世紀60年代末在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種現(xiàn)代色譜分析方法，歷*曾出現(xiàn)過不同的叫法，如,，高壓液相色譜（HPLC）、高速液相色譜（HSLC）和高分辨液相色譜（HRLC）,。就分離原理而言,，HPLC與經(jīng)典柱層析（色譜）沒有本質(zhì)的區(qū)別，但由于采用了高壓輸液泵,、微粒固定相和高靈敏度檢測器,，HPLC在分析速度、分離效率,、檢測靈敏度和操作自動化方面,，都達到了可與GC相比的程度，并保持了樣品適用范圍廣,、流動相種類多和便于制備的柱層析優(yōu)點,，在生物工程、制藥工業(yè),、食品工業(yè),、環(huán)境監(jiān)測和石油化工等領(lǐng)域獲得了廣泛的應用！ HPLC的特點：①樣品適用范圍廣,；②分離效率高,；③檢測靈敏度高；④分析速度快,；⑤樣品回收方便,； 液相色譜法的分類：HPLC的分類方法有多種,，比較常見的有三種：（1）按照分離機理分類：①吸附色譜②分配色譜③離子交換色譜（IEC）④體積排阻色譜（SEC）⑤親和色譜（AC）（2）按照色譜柱洗脫動力學分類:①洗脫法②前沿法③置換法（3） 按照分離目的分類：①分析液相色譜②制備液相色譜 HPLC分析常用的樣品處理技術(shù):粉碎、冷凍干燥,、氣體萃?。斂辗治龊痛祾?捕集）、溶劑萃?。ɑ亓骰蛩魇陷腿。訅喝軇┹腿,。?、固相萃取、固相微萃取,、超臨界流體萃取,、微波萃取、超聲波萃取,、微透析,、衍生化、膜分離,、蒸餾,、吸附、離心,、過濾,、濃縮和溶解等。 色譜定性分析方法標準物質(zhì)對照定性,；利用文獻數(shù)據(jù)定性,；利用選擇性檢測器定性；在線聯(lián)用儀器定性,；其它定性方法,； 液相色譜儀使用及維護方法液相色譜儀使用時要非常注意！使用卡套柱時,，兩端的卡套應時刻連接在柱芯上,。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時候都不能將卡套取下來,，否則會造成填料的流失,。 液相色譜柱使用注意：卡套柱的安裝（加預柱）：將卡套架套入柱芯將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于柱芯將已套到柱芯上的卡套架向上推,，直至高過夾套片將“子彈頭"預柱放入卡套片內(nèi)將卡套帽和卡套架旋在一起,，然后用手擰緊然后依同樣的順序連接好柱子的另一端平衡色譜柱 反相色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在乙腈/水中的。請一定確保您所使用的流動相和乙腈/水互溶,。由于色譜柱在儲存或運輸過程中可能會干掉,，因此在用流動相分析樣品之前，應使用10～20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱,；如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽,，應注意用純水“過渡"。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在正庚烷中的,。如果該色譜柱需要使用含水的流動相,，請在使用流動相之前用乙醇或異丙醇平衡如何平衡色譜柱？平衡過程中,，將流速緩慢地提高用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑度如果較低,，則需要較長的時間來平衡）色譜柱的再生。,。,。進行色譜柱再生時，應使用一個廉價的泵,，我們建議不使用您的液相色譜儀上的泵,。 注意：在對NH2改性的色譜柱進行再生時，由于NH2可能成銨根離子的形式存在,，因此,，應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液*流出,。如果簡單的有機溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì),，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。 液相色譜的常用術(shù)語1.色譜曲線（chromatogram）：在色譜法中,，當樣品加入后,，樣品中各組分隨著流動相的不斷向前移動而在兩相間反復進行溶解、揮發(fā),，或吸附,、解吸的過程。如果各組分在固定相中的分配系數(shù)（表示溶解或吸附的能力）不同,，就有可能達到分離,。分配系數(shù)小的組分滯留在固定相中的時間短，在柱內(nèi)移動的速度快,，先流出柱子,；分配系數(shù)大的組分滯留在固定相中的時間長，在柱內(nèi)移動的速度慢,，后流出柱子,；分離后的各組分經(jīng)檢測器轉(zhuǎn)換成電信號而記錄下來，得到一條信號隨時間變化的曲線,，稱為色譜流出曲線或 “色譜峰",，理想的色譜流出曲線應該是正態(tài)分布曲線,。2.（色譜）峰（chromatographic peak）：色譜柱流出組分通過檢測器系統(tǒng)時所產(chǎn)生的響應信號的微分曲線。3.峰底（peak base）：峰的起點與終點之間的連接的直線,。4.峰高（h,，peak height）：色譜峰zui大值點到峰底的距離。5.峰寬（W ,，peak width）：在峰兩側(cè)拐點處所作切線與峰底相交兩點的距離,。6.半高峰寬（Wh/2 ，peak with d at half height）：通過峰高的中點作平行于峰底的直線,，此直線與峰兩側(cè)相交兩點之間的距離（圖1 中的HJ）,。7.峰面積（A ，peak area）：峰與峰底之間的面積（圖1中的CHEJDC）,。8.拖尾峰（tailing peak）：后沿較前沿平緩的不對稱的峰。9.前伸峰（leading peak）：前沿較后沿平緩的不對稱的峰,。（又叫伸舌峰,、前延峰）10.假峰（ghost peak）：除組分正常產(chǎn)生的色譜峰外，由于儀器條件的變化等原因而在譜圖上出現(xiàn)的色譜峰,，即并非由試樣所產(chǎn)生的峰,。這種色譜峰并不代表具體某一組分，容易給定性,、定量帶來誤差,。（又叫鬼峰）11.畸峰（distrorted peak）：形狀不對稱的色譜峰，前伸峰,、拖尾峰都屬于這類,。 12.反峰（negative peak）：也稱倒峰、負峰,，即出峰的方向與通常的方向相反的色譜峰,。
