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當(dāng)前位置:杭州瑞析科技有限公司>>公司動(dòng)態(tài)>>關(guān)于液相色譜法的介紹
液相色譜法(HPLC)是20世紀(jì)60年代末70年代初發(fā)展起來(lái)的一種新型分離分析技術(shù),,隨著不斷改進(jìn)與發(fā)展,,目前已成為應(yīng)用極為廣泛的化學(xué)分離分析的重要手段。它是在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上,引入了氣相色譜的理論,在技術(shù)上采用了高壓泵,、固定相和高靈敏度檢測(cè)器,因而具備速度快、效率高、靈敏度高、操作自動(dòng)化的特點(diǎn),。為了更好地了解液相色譜法*性,現(xiàn)從兩方面進(jìn)行比較:
1.液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法
液相色譜法比起經(jīng)典液相色譜法的更大優(yōu)點(diǎn)在于高速,、,、高靈敏度、高自動(dòng)化,。高速是指在分析速度上比經(jīng)典液相色譜法快數(shù)百倍,。由于經(jīng)典色譜是重力加料,流出速度極慢,;而液相色譜配備了高壓輸液設(shè)備,,流速更高可達(dá) 103cm·min-1.例如分離苯的羥基化合物,7個(gè)組分只需1min就可完成,。對(duì)氨基酸分離,,用經(jīng)典色譜法,柱長(zhǎng)約170cm,,柱徑0.9cm,,流動(dòng)相速度為30cm3·h-1,需用20多小時(shí)才能分離出20種氨基酸,;而用液相色譜法,,只需lh之內(nèi)即可完成。又如用25cm×0.46cm的Lichrosorb-ODS(5μ)的柱,,采用梯度洗脫,,可在不到0.5h內(nèi)分離出尿中104個(gè)組分.
2.液相色譜法與氣相色譜法
(l)氣相色譜法分析對(duì)象只限于分析氣體和沸點(diǎn)較低的化合物,它們僅占有機(jī)物總數(shù)的20%,。對(duì)于占有機(jī)物總數(shù)近80%的那些高沸點(diǎn),、熱穩(wěn)定性差,、摩爾質(zhì)量大的物質(zhì),,目前主要采用液相色譜法進(jìn)行分離和分析,。
(2)氣相色譜采用流動(dòng)相是惰性氣體,,它對(duì)組分沒(méi)有親和力,即不產(chǎn)生相互作用力,,僅起運(yùn)載作用,。而液相色譜法中流動(dòng)相可選用不同極性的液體,選擇余地大,,它對(duì)組分可產(chǎn)生一定親和力,,并參與固定相對(duì)組分作用的劇烈競(jìng)爭(zhēng),。因此,流動(dòng)相對(duì)分離起很大作用,,相當(dāng)于增加了一個(gè)控制和改進(jìn)分離條件的參數(shù),,這為選擇更佳分離條件提供了極大方便。
(3)氣相色譜一般都在較高溫度下進(jìn)行的,而液相色譜法則經(jīng)常可在室溫條件下工作,。
總之,,液相色譜法是吸取了氣相色譜與經(jīng)典液相色譜優(yōu)點(diǎn),,并用現(xiàn)代化手段加以改進(jìn),,因此得到迅猛的發(fā)展,。目前液相色譜法已被廣泛應(yīng)用于分析對(duì)生物學(xué)和醫(yī)藥上有重大意義的大分子物質(zhì),例如蛋白質(zhì),、核酸,、氨基酸、多糖類(lèi),、植物色素,、高聚物、染料及藥物等物質(zhì)的分離和分析,。
液相色譜法的儀器設(shè)備費(fèi)用昂貴,,操作嚴(yán)格,這是它的主要缺點(diǎn),。
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