下面就一一介紹下液相色譜使用中的幾個重要環(huán)節(jié)吧。
實驗前的準備工作
1. 過濾流動相,。為了保證流動相潔凈,，流動相使用前都必須微膜過濾。
2. 流動相脫氣,。為了避免流動相中氣泡對儀器（氣泡可能會對儀器及相關(guān)設(shè)備的正常使用及壽命產(chǎn)生一定影響）及分析結(jié)果的影響,。
3. 運行液相泵前盡量先清洗泵柱塞部件。清洗液一般采用10%甲醇溶液,，也有采用10%異丙醇溶液（5%甲醇或異丙醇等有機相溶液能避免微生物污染,，但濃度不能太高，高于20%緩沖液可能會導致鹽結(jié)晶析出,，碰到酸堿類物質(zhì)可能會有比較強烈的反應(yīng),；另外異丙醇粘度較大，清洗能力較強,；也有采用純水清洗的,，這樣如果儀器每天使用還行，如果長期不用,，為了防止微生物繁殖,，純水還得用含有有機相的清洗液置換出去）沖洗，這是為了保護泵柱塞和密封圈等部件在泵運行時不被結(jié)晶鹽等磨損而導致泵頭漏液。
4. 每天運行儀器前先排氣,。一般的液相色譜儀都有排氣功能,，沒有的可以不接色譜柱開機運行幾分鐘排氣。
5. 泵運行時盡量不采用大流量模式（主要是換流動相或排氣泡等,，流量盡量設(shè)為3.0ml/min以內(nèi),，這樣更有利于保護泵柱塞桿和密封圈等部件的壽命）。
6. 分析前先對色譜系統(tǒng)（整個流路）進行沖洗及平衡,，尤其是色譜柱,。先用純甲醇沖洗30分鐘，再換10%甲醇水溶液沖洗30分鐘,，后換含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)的流動相平衡30分鐘,。色譜柱如果長期沒用，每一步?jīng)_洗,、平衡量盡量為色譜柱柱容量20倍以上）,。如果流動相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)，純甲醇沖洗完可直接換為流動相,。使用色譜柱前知道或懷疑色譜柱中殘留有或酸堿鹽類物質(zhì),，在用純甲醇沖洗前增加一步10%甲醇水溶液沖洗。
7. 如果色譜柱需要控溫（升溫）,，要先運行泵后再設(shè)柱溫箱溫度,。
8. 待儀器運行穩(wěn)定后（基線基本走平后，這個是經(jīng)驗值）,，方可進樣,。
樣品前處理
1.樣品濃度不要太大，雜質(zhì)不要太多,，否則色譜柱處理起來壓力很大,。
2.進樣前樣品一定得先經(jīng)微膜（一般采用0.22um或0.45um微膜）過濾。
實驗過程中注意事項
1.為了避免進樣器殘留影響,，進樣前先對進樣器進行清洗（這個不是必須的,，但盡量是每進一針樣品或標準品前都清洗進樣器和進樣針，當然同一樣品也可以不洗,，不同樣品盡量洗）,，清洗順序為純水、甲醇,、流動相,。
2.每進一針樣品后要對系統(tǒng)進行一次沖洗、平衡后再進下一針樣品（等度要求不高,，梯度要求相對高,，主要是沖洗色譜柱中殘留的強保留物質(zhì)）,。
實驗完畢的后續(xù)工作
1.做完樣要先清洗進樣器，清洗順序為純水,、甲醇,。
2.關(guān)閉柱溫箱溫度設(shè)置。
3.沖洗色譜系統(tǒng)及色譜柱,。先用10%甲醇水溶液沖洗30分鐘后換為純甲醇沖洗30分鐘,，待基線基本走平停泵。如果流動相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì),，沖洗時流動相可直接換為純甲醇,。色譜柱用完后如果長時間內(nèi)不會再用，純甲醇沖洗量要大于色譜柱柱容量20倍以上的,，沖洗后卸下,，兩端密封保存。
4.待色譜柱溫度降至接近于室溫時再停泵,、關(guān)機（這一點需特別注意,，目的是防止溫度過高損壞色譜柱）。
5.關(guān)機前用清洗液清洗柱塞桿,。