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ZF紫外分析儀是熒光技術(shù)的應(yīng)用,熒光技術(shù)是什么呢? 首先了解一下什么是熒光,,熒光又作"螢光",是指一種光致發(fā)光的冷發(fā)光現(xiàn)象。當某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長的入射光(通常是紫外線或X射線)照射,吸收光能后進入激發(fā)態(tài),,并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光的的波長長的出射光(通常波長在可見光波段);而且一旦停止入射光,發(fā)光現(xiàn)象也隨之立即消失,。具有這種性質(zhì)的出射光就被稱之為熒光,。 知道了什么是熒光,顧名思義就能想到什么是熒光技術(shù),。熒光技術(shù)是某些物質(zhì)受一定波長的光激發(fā)后,,在極短時間內(nèi)(10-8秒)會發(fā)射出波長大于激發(fā)波長的光,這種光稱為熒光,。這一發(fā)光現(xiàn)象在各方面的應(yīng)用及有關(guān)的方法稱為熒光技術(shù)(fluorescent technique),。
物質(zhì)經(jīng)過紫外線照射后發(fā)出熒光的現(xiàn)象可分為兩種情況,種是自發(fā)熒光,,如葉綠素,、血紅素等經(jīng)紫外線照射后,能發(fā)出紅色的熒光,,稱為自發(fā)熒光;第二種是誘發(fā)熒光,,即物體經(jīng)熒光染料染色后再通過紫外線照射發(fā)出熒光,稱為誘發(fā)熒光,。
熒光技術(shù)在生物化學及分子生物學研究中應(yīng)用主要包括以下幾個方面:
1,、物質(zhì)的定性:不同的熒光物質(zhì)有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜,因此可用熒光進行物質(zhì)的鑒別,。與吸收光譜法相比,,熒光法具有更高的選擇性。
2,、定量測定:利用在較低濃度下熒光強度與樣品濃度成正比這一關(guān)系可以定量分析樣品中熒光組分的含量,,常用于測定氨基酸、蛋白質(zhì),、核酸的含量,。熒光定量測定的一個優(yōu)點是靈敏度高,例如維生素B2的測定*可達1毫微克/毫升,,這一優(yōu)點使測定時所需要樣品量大大減少,。 這種定量測定方法還可應(yīng)用于酶催化的反應(yīng),只要反應(yīng)前后有熒光強度的變化,,就可用來測定酶的含量及酶反應(yīng)的速率等,。
3、研究生物大分子的物理化學特性及其分子的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象:熒光的激發(fā)光譜,、發(fā)射光譜,、量子產(chǎn)率和熒光壽命等參數(shù)不僅和分子內(nèi)熒光發(fā)色基團的本身結(jié)構(gòu)有關(guān),而且還強烈地依賴于發(fā)色團周圍的環(huán)境,即對周圍環(huán)境十分敏感,。利用此特點可通過測定上述有關(guān)熒光參數(shù)的變化來研究熒光發(fā)色團所在部位的微環(huán)境的特征及其變化,。在此研究中,除了利用生物大分子本身具有的熒光發(fā)色團(如色氨酸,、酪氨酸,、鳥苷酸等,此類熒光稱為內(nèi)源熒光)以外,,可將一些特殊的熒光染料分子共價地結(jié)合或吸附在生物大分子的某一部位,,通過測定該染料分子的熒光特性變化來研究生物大分子,這種染料分子被稱為"熒光探針",,它們發(fā)出的熒光一般稱為外源熒光,。熒光探針的應(yīng)用,大大地開拓了熒光技術(shù)在分子生物學中的應(yīng)用范圍,。
4,、利用熒光壽命、量子產(chǎn)率等參數(shù)可以研究生物大分子中的能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象:通過該現(xiàn)象的研究,,可以獲得生物大分子內(nèi)部的許多信息,。
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