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PCR基因擴(kuò)增儀的“位置的邊緣效應(yīng)”實(shí)驗(yàn)過程
閱讀：2792 發(fā)布時(shí)間：2021-12-3
PCR基因擴(kuò)增儀又稱為PCR基因擴(kuò)增儀,、PCR核酸擴(kuò)增儀、聚合酶鏈反應(yīng)核酸擴(kuò)增儀，是利用PCR(Polymerasechainreaction，聚合酶鏈反應(yīng))技術(shù)對特定DNA擴(kuò)增的一種儀器設(shè)備,，被廣泛運(yùn)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中,，例如用于判斷檢體中是否會表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜,、傳染病的診斷、基因復(fù)制以及親子鑒定等,。
PCR基因擴(kuò)增儀“位置的邊緣效應(yīng)”實(shí)驗(yàn)過程：
PCR基因擴(kuò)增儀主要是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成,，用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制。PCR儀的原理為利用升溫使DNA變性,，用限制性內(nèi)切酶使DNA雙鏈解鏈，在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈,，進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的,。
PCR原理為雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶的作用下,，以單鏈為模版,，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成新的單鏈，與模版配對成為雙鏈分子挎貝,。在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈,。因此,，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)與模板DNA的5’端結(jié)合的兩條引物,，加入DNA聚合酶,、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制，多次重復(fù)“變性解鏈—退火—合成延伸”的循環(huán)就可以以幾何級數(shù)大量擴(kuò)增特定的基因,。這就是PCR實(shí)驗(yàn)過程.
想得到一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果,zui關(guān)鍵所使用的PCR基因擴(kuò)增儀,溫度均性是否穩(wěn)定均勻.PCR溫度均勻是指樣品孔間的溫度差異,，它關(guān)系到在不同樣品孔進(jìn)行反應(yīng)結(jié)果的一致。我們在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有時(shí)用同樣的樣品,，同樣的PCR反應(yīng)程序,，zui后的結(jié)果竟然差異非常明顯,，或許就是因?yàn)椴煌恢玫臏囟炔痪恍运隆Ｋ砸恍?shí)驗(yàn)人在做實(shí)驗(yàn)中就固定用著那幾個(gè)孔,，就是因?yàn)檫^往反復(fù)的教訓(xùn)和認(rèn)真的思索得出的結(jié)果.這個(gè)被我們稱為“位置的邊緣效應(yīng)”,即原因就是PCR儀的溫度均勻性不好,，特別是zui外周的樣品孔，溫度不均勻就會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。