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PCR技術(shù)的特點(diǎn)介紹
閱讀：7693 發(fā)布時(shí)間：2018-3-20
1,、有一定程度單核苷酸錯(cuò)誤摻入
TaqDNA聚合酶缺少3’-5’核酸外切酶活性,，因而不能糾正反應(yīng)中發(fā)生的核苷酸錯(cuò)誤摻人,；與大腸桿菌聚合酶IKlenow片段相比較,，用TaqDNA聚合酶的反應(yīng)錯(cuò)誤摻人相對(duì)多些,。但在PCR擴(kuò)增過程中，其錯(cuò)配率一般只有約1／萬,，足可以供特異性分析,。
2、操作簡便,、快速
目前國內(nèi)外已有多種類型的PCR擴(kuò)增儀,，只需把反應(yīng)材料按一定濃度混合，置于儀器內(nèi),，反應(yīng)便按所輸入的程序進(jìn)行,。整個(gè)PCR操作過程，從標(biāo)本處理,、PCR擴(kuò)增到產(chǎn)物分析,，可在4h內(nèi)完成全部實(shí)驗(yàn)。擴(kuò)增產(chǎn)物可直接供作序列分析和分子克隆,，擺脫繁瑣的基因分析方法,；可直接從總RNA或DNA中或部分DNA已降解的樣品中分離目的基因，省去須先進(jìn)行克隆后再作序列分析的模式,。已固定和包埋的組織或切片亦可用于檢測(cè),。
3、對(duì)起始材料質(zhì)量要求低
PCR技術(shù)對(duì)擴(kuò)增樣品的要求不高,，僅含極微量目的DNA（pg,、ng）、DNA粗制樣品或者總RNA,，都可用做起始材料來獲得較多的目的產(chǎn)物,。擴(kuò)增樣品既可以是純化的，也可以是粗制的,；既可以是新鮮組織,，也可以是陳舊樣品；既可以是細(xì)胞,，也可以是體液,；既可以是完整的大分子，也可以是部分降解的DNA,。
4、可擴(kuò)增RNA或cDNA
先按通常方法用寡脫氧核苷酸引物和反轉(zhuǎn)錄酶將mRNA轉(zhuǎn)錄成主鏈cDNA,，再將得到的單鏈cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,。即使mRNA轉(zhuǎn)錄片段只有cDNA中的0．01％，也能經(jīng)PCR擴(kuò)增出10倍242bp對(duì)長度的特異性片段,。有些外顯子分散在一段很長的DNA中,，難于將整段DNA大分子擴(kuò)增和做序列分析,。若以mRNA作為模板，則可將外顯子集中,，用PCRl次便完成對(duì)外顯子的擴(kuò)增并進(jìn)行序列分析,。
5、特異性強(qiáng)
自從提取出耐熱TaqDNA聚合酶以來,，在熱變性處理時(shí)不被消化,、不必在每次循環(huán)擴(kuò)增中再加入新酶，以及在較高溫度下連續(xù)反應(yīng),，顯著提高了PCR反應(yīng)產(chǎn)物的特異性,。PCR擴(kuò)增的特異性還依賴于兩個(gè)引物設(shè)計(jì)的好壞，依賴于引物與模板結(jié)合的正確性,。PCR反應(yīng)時(shí)退火溫度對(duì)特異性也有影響,，一般來說，退火溫度越高,，擴(kuò)增的特異性越好,。高溫啟動(dòng)法也可增加PCR擴(kuò)增的特異性，即通過在高溫（70℃）下加入某些必需因子（DNA聚合酶,、模板DNA,、Mg2+或引物等），使TaqDNA聚合酶僅在反應(yīng)達(dá)到較高溫度（>70℃）時(shí)才發(fā)揮作用,。其他因素如酶濃度,、dNTP、Mg2+,、pH值等對(duì)PCR的特異性也有一定的影響,。
6、敏感性高
PCR產(chǎn)物的生成以指數(shù)方式增加,，能將極微量的靶DNA成百萬倍以上地?cái)U(kuò)增到足夠檢測(cè)分析量的DNA,，它可對(duì)單拷貝基因、單個(gè)細(xì)胞,、單根頭發(fā),、一滴血等微量標(biāo)本進(jìn)行分析。