1.氣泡
由于HPLC系統(tǒng)中氣泡的存在，會(huì)造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪聲峰,，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成分析靈敏度下降,；氣泡變大進(jìn)入流路或色譜柱時(shí)會(huì)使流動(dòng)相的流速變慢或不穩(wěn)定，使基線起伏,。造成上述現(xiàn)象的主要原因有三條：一是流動(dòng)相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡,；二是系統(tǒng)開始工作時(shí)未能將流路中的空氣驅(qū)趕干凈；三是在注入樣品時(shí)不注意混入了空氣,。
為了避免這類問題的出現(xiàn),，HPLC實(shí)際分析過程中必須重視對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理；在HPLC系統(tǒng)開始工作前,，可以用注射器連接恒流泵的排空閥,，抽入流動(dòng)相，將流路中的空氣驅(qū)趕干凈,；在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣,。
    2.柱溫
在操作HPLC時(shí)，色譜柱是在室溫環(huán)境下工作的,。大多數(shù)的工作環(huán)境溫度是不斷變化的，溫度的差別就會(huì)引起較復(fù)雜的問題,。溫度的影響在所有的色譜分析方式中都是存在的,，HPLC方法中的洗脫方式受溫度的影響。
等度洗脫時(shí)溫度會(huì)影響保留時(shí)間,，當(dāng)溫度升高時(shí)所有的色譜峰都前移了,，等度洗脫時(shí)一般溫度每升高１℃，保留時(shí)間會(huì)縮短（1~3）％,。溫度變化對(duì)梯度洗脫和等度洗脫的影響趨勢(shì)是一樣的,。溫度變化對(duì)梯度洗脫的影響要小于對(duì)等度洗脫的影響。即便如此,，若梯度洗脫時(shí)不控制溫度的話,，保留值一般也會(huì)有較大的變化。溫度變化還可能引起選擇性顯著變化,。
正如柱子不能*平衡將導(dǎo)致保留時(shí)間的重現(xiàn)性差一樣,，柱溫不平衡也會(huì)導(dǎo)致不理想的后果，這個(gè)問題在峰寬上的影響尤其明顯,。當(dāng)溫度變化時(shí)除了選擇性和保留時(shí)間的變化之外,，峰寬也會(huì)發(fā)生變化,。升高溫度通常會(huì)使理論塔板數(shù)升高，峰寬變窄,，由于峰面積不變,，峰越窄就會(huì)越高，因此升高溫度可以達(dá)到更小的檢測(cè)限,。
柱子里的溫度變化也會(huì)影響峰形,。當(dāng)流動(dòng)相和柱子之間的溫差增大時(shí)，由溫度不平衡而導(dǎo)致的峰變形就會(huì)加劇,。
為了獲得一致的結(jié)果我們必須要控制柱溫,，使用柱溫箱是的辦法。如果沒有柱溫箱,，zui有效的辦法就是將色譜柱隔絕在一個(gè)溫度波動(dòng)zui小的地方,。
3. 色譜柱污染
    色譜柱污染會(huì)引起保留時(shí)間漂移。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器,，它可以過濾并吸附流動(dòng)相攜帶的任何物質(zhì),。污染源可能是：流動(dòng)相本身，流動(dòng)相容器,，連接管,、泵、進(jìn)樣器和儀器密封墊,，以及樣品等,。
樣品中如果存在色譜柱上保留很強(qiáng)的組分，就可能使保留時(shí)間漂移,。通常樣品中的強(qiáng)保留組分具有較高的分子量,，在此情況下，保留時(shí)間漂移的同時(shí)或其后會(huì)有反壓的增加,?？梢酝ㄟ^使用固相提取等樣品前處理方法來去除樣品基質(zhì)的影響。
避免色譜柱污染zui簡單的方法是防患于未然,。相比之下,，找到問題的所在并設(shè)計(jì)有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強(qiáng)溶劑,，但并非所有污染物都可以在流動(dòng)相中溶解,。
使用保護(hù)柱是個(gè)非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時(shí)采用的辦法,。
4.色譜柱平衡
    如果我們觀察到保留時(shí)間漂移,，首先應(yīng)考慮色譜柱是否已用流動(dòng)相*平衡。通常平衡需要10~20個(gè)柱體積的流動(dòng)相,。但如果在流動(dòng)相中加入少量添加劑則需要相當(dāng)長的時(shí)間來平衡色譜柱,。需要柱子的充分平衡,，然后才能對(duì)HPLC進(jìn)行檢定。
5.流動(dòng)相有機(jī)溶劑
HPLC分析總要求使用HPLC純的試劑,，關(guān)鍵是兩點(diǎn)：純度高,、紫外吸收小。純度高,，是希望沒有雜質(zhì)干擾HPLC分析,；不會(huì)有金屬離子損害純度為99.99%以上的高純度硅膠基質(zhì)?？梢酝ㄟ^重蒸分析純?nèi)軇?；或?yàn)V膜過濾，并定期把前置的過濾頭取下,，放稀硝酸里清洗,，再用純水洗至中性。
流動(dòng)相有機(jī)溶劑可能影響HPLC的檢測(cè)限,。
6.柱壓
柱壓過高是HPLC分析中常碰到的問題,。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題,。溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),，這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升，應(yīng)更換柱子入口篩板,；泵內(nèi)有空氣,，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理,；比例閥失效,，應(yīng)更換比例閥；泵密封墊損壞,，應(yīng)更換密封墊；系統(tǒng)檢漏,，則找出漏點(diǎn),，密封即可。
HPLC分析中,，在色譜柱正常,，樣品靈敏度足夠，分析方法合適,，色譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下,，峰形應(yīng)對(duì)稱而尖銳。充分考慮到可能影響分析結(jié)果的因素,，可以科學(xué)地進(jìn)行液相色譜儀的檢定,。