分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器,。該儀器是食品廠、飲用水廠辦理QS,、HACCP認(rèn)證的*檢驗(yàn)設(shè)備,。 　　分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量,。儀器分光光度計(jì)主要由光源、單色器,、樣品室、檢測(cè)器,、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成,。 　　分光光度計(jì)計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過系列分光裝置,，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源,，光源透過測(cè)試的樣品后，部分光源被吸收,，計(jì)算樣品的吸光值,，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比,。 核酸的定量 　　核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率zui高的功能,。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,，單鏈,、雙鏈DNA，以及RNA,。核酸的zui高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm,。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同,。定量不同類型的核酸,，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA,，37μg/ml的ssDNA,，40μg/ml的RNA,，30μg/ml的Olig。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,，從而得出相應(yīng)的樣品濃度,。測(cè)試前，選擇正確的程序,，輸入原液和稀釋液的體積,，爾后測(cè)試空白液和樣品液。然而,，實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順,。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者zui頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大,。 事實(shí)上，分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理,，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化,，即分光光度計(jì)有一定的準(zhǔn)確度和度。如Eppendorf Biophotometer的準(zhǔn)確度≤1.0%（1A）,。這樣多次測(cè)試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動(dòng),，都是正常的。另外,，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值,，離子濃度等：在測(cè)試時(shí)，離子濃度太高,，也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移,，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液,，如TE,，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒,，尤其是核酸樣品,。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果。為了zui大程度減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響,，要求核酸吸光值至少大于0.1A,，吸光值在0.1-1.。在此范圍內(nèi),，顆粒的干擾相對(duì)較小,，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低,，或者過高（超過光度計(jì)的測(cè)試范圍）,。zui后是操作因素,，如混合要充分，否則吸光值太低,，甚至出現(xiàn)負(fù)值,；混合液不能存在氣泡，空白液無

   分光光度計(jì)的特點(diǎn)：
         采用微機(jī)控制并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,。　　□用干涉濾光片作為分光元件,，光電管進(jìn)行光電轉(zhuǎn)換。　　□具有鉀,、鈉濃度直讀,，曲線擬合，靈敏度漂移,，自動(dòng)校正,，自動(dòng)調(diào)滿度?；鹧婺芰恐甘?，操作失誤顯示，打印結(jié)果等功能,。　　□線性穩(wěn)定性,、重現(xiàn)性好,，尤其適合臨床應(yīng)用,。

    分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。該儀器是食品廠,、飲用水廠辦理QS、HACCP認(rèn)證的*檢驗(yàn)設(shè)備,。
     分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。儀器分光光度計(jì)主要由光源,、單色器、樣品室,、檢測(cè)器,、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成,。
      分光光度計(jì)計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過系列分光裝置,，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源,，光源透過測(cè)試的樣品后,，部分光源被吸收,，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度,。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率zui高的功能,。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,，單鏈、雙鏈DNA,，以及RNA。核酸的zui高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm,。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同,。定量不同類型的核酸，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù),。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA,，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig,。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,，從而得出相應(yīng)的樣品濃度,。測(cè)試前,，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積,，爾后測(cè)試空白液和樣品液。然而,，實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者zui頭痛的問題,。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大,。
事實(shí)上，分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理,，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即分光光度計(jì)有一定的準(zhǔn)確度和度,。如Eppendorf Biophotometer的準(zhǔn)確度≤1.0%（1A）。這樣多次測(cè)試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動(dòng),，都是正常的,。另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值,，離子濃度等：在測(cè)試時(shí)，離子濃度太高,，也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值一定,、離子濃度較低的緩沖液,，如TE,，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒,，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果,。為了zui大程度減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A,，吸光值在0.1-1.。在此范圍內(nèi),，顆粒的干擾相對(duì)較小，結(jié)果穩(wěn)定,。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高（超過光度計(jì)的測(cè)試范圍）,。zui后是操作因素，如混合要充分,，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負(fù)值,；混合液不能存在氣泡，空白液無