液相色譜柱的分類
液相色譜柱的分類:(按色譜固定相基質(zhì)分)
一.硅膠基質(zhì):
1.反相色譜柱:
反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ),,表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。
反相色譜所使用的流動相極性較強,,通常為水,,緩沖液與甲醇,,已腈等混合物。
樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合zui先被沖出,,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留,。
常用的反相填料有C18(ODS),、C8(MOS)、C4(B),、C6H5(Phenyl)等,。
2.正相色譜:
正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica),以及其他具有極性官能團,,如胺基團(NH2,APS)和氰基團(CN,,CPS)的鍵合相填料。
由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他團的極性較強,,因此,,分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小,即極性強弱的組份zui先被沖洗出色譜柱,。
正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,,如:正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
3.離子交換色譜柱:以磺化交聯(lián)強陰/陽離子鍵合硅膠色譜柱,,常用規(guī)格:強陰離子色譜柱(SAX),,強陽離子交換色譜柱(SCX)
二 .聚合物基質(zhì):
聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要優(yōu)點是在PH值為1~14均可使用,。相對與硅膠基質(zhì)的C18填料,,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?,F(xiàn)在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料,,色譜柱柱效較低。
三.其他無機填料:
其它HPLC的無機填料色譜柱也已經(jīng)商品化,。由于其特殊的性質(zhì),,一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料,。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,,石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),,不再需其它的表面改性,,該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強,石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體,,又由于HPLC流動相中不會被溶解,,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC,,
氧化鋁微粒剛性強,,可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,其優(yōu)點是可在PH高達12的流動相中使用,。
但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強,,應(yīng)用范圍受到一定的限制,,所以未能廣泛應(yīng)用,新型氧化鋯填料也可用于HPLC,,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,,應(yīng)用PH范圍1~14,溫度可達100℃,。由于氧化鋯填料幾年才開始研究,,加之面臨的實驗難度,其重要用途與優(yōu)勢尚在進行中,。