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如何選擇合適的凝膠填料
閱讀：4368發(fā)布時(shí)間：2016-6-21
做分離純化工作的人都知道,，作為凝膠柱層析中的關(guān)鍵一環(huán)，選擇合適的填料是關(guān)重要的,。今天小編為大家介紹一下幾點(diǎn)以供參考：
1.當(dāng)目標(biāo)蛋白的物理特性如分子量,、PI等都不清楚時(shí)，可用PAGE電泳方法或?qū)游龇椒右詼y(cè)定,。分離范圍廣闊的Superose HR預(yù)裝柱很適合測(cè)定未知蛋白的分子量,。用少量離子交換介質(zhì)在多個(gè)含不同PH緩沖液的試管中，可簡(jiǎn)易地測(cè)出PI,，并選擇純化用緩沖液的佳PH,。
2.若對(duì)目標(biāo)蛋白的特性或樣品成分不太了解，可嘗試幾種不同的純化方法：
(1)使用通用的凝膠過(guò)濾方法,，選擇分離范圍廣闊的介質(zhì)如Superose,、Sephacryl HR依據(jù)分子量將 樣品分成不同組份。
(2)用含專一配體或抗體的親和層析介質(zhì)結(jié)合目標(biāo)蛋白,。亦可用各種活化偶聯(lián)介質(zhì)偶聯(lián)目標(biāo)蛋白的底物,、受體等自制親和介質(zhì)，再用以結(jié)合目標(biāo)蛋白,。一步即可得到高純度樣品,。
(3)體積大的樣品,，往往使用離子交換層析加以濃縮及粗純化。高鹽洗脫的樣品,，可再用疏水層析純化,。疏水層析利用高鹽吸附、低鹽洗脫的原理,，洗脫樣品又可直接上離子交換等吸附性層析,。兩種方法常被交替使用于純化流程中。
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