疏水作用色譜概述

閱讀：3429發(fā)布時間：2016-1-20

疏水作用色譜始于1972年SHaltiel及其工作者，他們利用帶有碳?xì)浠衔锱浠沫傊悄z以“疏水親和色譜”分離蛋白質(zhì),。在其他實驗室內(nèi)也進(jìn)行了類似研究和探索,，1976年Hofstee將這種類型的色譜命名為疏水作用色譜。1980 年前后,，不少學(xué)者就疏水作用的機理,、分離規(guī)律等進(jìn)行了大量研究，但這些工作多是用軟或半硬基質(zhì)進(jìn)行的,，其基本形式是將短烷基鏈鍵合于親水性基球上,，作為配基的烷基鏈的密度通常不大，且操作壓力和流速均不能提高,。為改善HIC的分離效率和分離速度,，出現(xiàn)了以硬質(zhì)高聚物微球、硅膠以及CPG為基質(zhì)的HIC 固定相,。

與其他類型相比,，對用于這種填料的硅膠基質(zhì)并沒有特殊的要求，只要孔徑在25-100nm之間且有較大的比表面積就可以應(yīng)用,，與對CPG的要求相似,。只要經(jīng)過表面修飾或涂層，使其具有合適的親水表面和較弱的疏水基,，就可以制備出疏水作用色譜,。
盡管曾研究過不同類型的疏水作用固定相，但有實用價值的主要是兩類,。一類是在基質(zhì)表面鍵合上短鏈烷烴或苯基而成,，例如，TOSOH公司的Pheny- TSK -Gel 3000SW,、Butyl-TSK 3000 SW柱均是很典型的商品HPHIC柱,。另一類是醚型鍵合相。在硅膠上先鍵合上環(huán)氧丙氧基三乙氧基硅烷,，再在路易士酸催化下接上短鏈烷氧基而成

如果將聚乙二醇與環(huán)氧化硅膠反應(yīng),，則可制備出聚乙二醇型HIC 填料。作者的實驗室曾以可控孔徑玻璃為基質(zhì),，鍵合以聚乙二醇,，制備出HIC填料。這種填料,，系無定型顆粒,，粒徑分25-37及5-10μm 兩種?？讖接?0,、60 以及100nm等幾種。使用了分子量為400,、600,、800、1000及2000的PEG為配基,，研究了不同色譜條件下蛋白質(zhì)的分離行為,。結(jié)果表明隨 PEG鏈長的增加，蛋白質(zhì)的保留加大,，比較適宜的是PEG600-1000,。對一般生化分離而言，孔徑30-60nm較為合適,。以結(jié)晶胰蛋白酶為樣品,，經(jīng).:( 分離后的活性回收率為近100%，表明這種.:( 填
料很適合于蛋白質(zhì)的分離,。耿信篤等以硅膠為基質(zhì),，以改性聚乙二醇為配基，制備了用于蛋白質(zhì)分離的HIC 填料,。在分離基因重組γ- 干擾素時發(fā)現(xiàn),，干擾素的活性回收率有異乎尋常的升高。經(jīng)研究后認(rèn)為,，這是由于HIC分離過程有利于變性蛋白的復(fù)性所致,。這更加說明，HIC是生物大分子分離和純化的一個重要的手段,。

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