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寡核苷酸類藥物檢測之尺寸排阻(SEC)色譜柱
閱讀:1992發(fā)布時(shí)間:2023-5-19
寡核苷酸類藥物檢測之尺寸排阻(SEC)色譜柱
隨著寡核苷酸藥物的研發(fā)步伐越來越快,,對(duì)高純度寡核苷酸產(chǎn)品的需求也日趨旺盛,。在今天的推送內(nèi)容里,,我們將介紹尺寸排阻色譜法在寡核苷酸藥物質(zhì)量控制中的應(yīng)用。
在寡核苷酸的分析中,,尺寸排阻分離模式是基于堿基數(shù)量,、磷酸基不同導(dǎo)致的分子量差別進(jìn)行分離,通常用于簡單的質(zhì)量控制或純度研究,。該模式的優(yōu)點(diǎn)是可以使用接近生理?xiàng)l件的洗脫溶液進(jìn)行等度分離,。有時(shí)也會(huì)添加水溶性有機(jī)溶劑來抑制疏水吸附。
分析不同堿基數(shù)目的寡核苷酸
下圖是采用兩根串聯(lián)的SEC色譜柱TSKgel UP-SW2000來區(qū)分長度相差一個(gè)堿基的寡核苷酸混合物 (20-mer和N-1 19-mer),。
TSKgel UP-SW2000是東曹生命科學(xué)最新開發(fā)的粒徑2μm,、孔徑12.5nm的硅膠基質(zhì)SEC色譜柱,主要用于分離分子量范圍為1-150kDa的小蛋白,、肽和寡核苷酸等生物分子,。該色譜柱兼容HPLC和UHPLC系統(tǒng),因此也能夠從傳統(tǒng)的HPLC-SEC方法轉(zhuǎn)換到UHPLC,。
下圖是使用TSKgel G2000SWXL色譜柱分離不同堿基數(shù)量的合成寡核苷酸混合物的譜圖,。為了抑制核酸酶活性,有時(shí)會(huì)在流動(dòng)相中添加EDTA等約1 mmol/L的螯合劑,。
SEC法分離脂質(zhì)體包被的siRNA
下圖是使用TSKgel SuperSW2000色譜柱對(duì)天然型DNA核酸藥物Defitelio進(jìn)行質(zhì)量分析的示例,。
參考文獻(xiàn):Handbook of analysis of oligonucleotides and related Products, Feb.23 (2011) 125, Edited by J.V. Bonilla et al.
寡核苷酸分析用SEC色譜柱
下表中列出了適用于核酸分離的SEC色譜柱,。對(duì)于<375 bp的短鏈核酸或寡核苷酸,UP-SW3000,、UP-SW2000,、G3000SWXL以及G2000SWXL這幾款色譜柱都是比較推薦的。
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