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chiral_agp 100.4操作說明
閱讀：4252發(fā)布時間：2011-7-21
CHIRAL-AGP 100.4操作說明
1,、安裝
AGP100.4出貨溶劑為15%異丙醇蒸餾水溶液,。先用蒸餾水沖洗，開始流速較低,，然后慢慢增加到0.5ml/min,，并維持2mins，隨后流速增加到0.8-0.9ml/min時保持10min,，使用流動相平衡色譜柱,，推薦流速為0.8-0.9ml/min。
為了保護(hù)分析柱不被高親和力和顆粒雜質(zhì)污染,，推薦使用保護(hù)柱,，且必須定期更換保護(hù)柱,，否則將影響分析柱的性能，用于生物分析時尤為重要,。
2,、保存
色譜柱室溫保存。使用時,，可以在色譜系統(tǒng)中過夜,。但是當(dāng)緩沖鹽中沒有有機(jī)改性劑，或者有機(jī)溶液中含有低濃度乙腈時,，必須非常小心,，因為在這樣的流動相中微生物生長迅速。所以流動相必須現(xiàn)場配制,。周末或者短期保存,，可將色譜柱置于10%異丙醇的蒸餾水中。長時間的保存,，請保存在15%的異丙醇蒸餾水中,，使用前，請重復(fù)操作上面的安裝步驟,。
3,、流動相組成
使用不同種類的緩沖液能得到的分離效果，比如：磷酸鈉或磷酸鉀緩沖液,，乙酸銨或乙酸鈉緩沖液,，甲酸甲酯或檸檬酸緩沖液。推薦濃度范圍0.01-0.1M,，正常：10-20mM,。
4、pH
色譜柱pH范圍：4-7,，pH值長時間的大于7或者小于4,，都可能縮短色譜柱壽命，導(dǎo)致二氧化硅分解,。
5,、有機(jī)改性劑
推薦使用下列有機(jī)改性劑：1-丙醇，異丙醇,，甲醇,，乙醇和乙腈，丙醇和異丙醇及乙腈是使用頻繁的有機(jī)改性劑,。無電荷改進(jìn)劑的類別和濃度對分離因子的影響很大,。如：1-丙醇，異丙醇和乙腈在異構(gòu)體選擇性方面有很大的不同,，見方法開發(fā)部分,。使用陽離子和陰離子改性劑也能調(diào)整保留時間和異構(gòu)體選擇性,。但是，由于對基體的高親和力,，有些改性劑很難全部洗脫,，這樣，可能影響色譜柱的性能,。我們推薦使用無電荷的,、陰離子的、陽離子的改性劑,。
室溫范圍20-25℃,，但是色譜柱也能在高于或低于該溫度下使用，然而當(dāng)色譜柱使用溫度過高時,，對所有硅膠基色譜柱,，都將縮短色譜柱壽命。
6,、樣品
當(dāng)進(jìn)樣針體積為10-20μL時,，推薦的樣品濃度低于0.10mg/ml，如果可能,，將樣品溶解在流動相中,，如果樣品在流動相溶解性不好，加一些高濃度的有機(jī)溶劑改性劑,，但是有機(jī)改性劑的濃度太高,，小心引起緩沖鹽析出沉淀,。避免將樣品溶在有機(jī)溶劑中,。不要注射不干凈的樣品或者樣品中包含有未溶解化合物。在生物分析過程中,，使用分離技術(shù)過濾樣品溶液,，定期更換保護(hù)柱。
7,、清洗色譜柱
如果色譜柱被疏水性原料污染了,，將色譜柱反過來（不接檢測器），用25%的異丙醇蒸餾水溶液沖洗一個晚上,，流速0.2ml/min,。
8、方法開發(fā)（UV檢測器）
| 樣品特征和初的流動相 | |
| 化合物類型 | 初流動相 |
| 疏水性化合物 | 10mM醋酸銨或醋酸鈉緩沖液,，pH4.5 |
| 親水胺,，弱酸（苯酚等），非質(zhì)子類（胺,，酯,，醇等） | 5%的異丙醇10mM磷酸鈉緩沖液,，pH7.0 |
| 強(qiáng)酸（羧酸） | 10mM磷酸鈉緩沖液，pH7.0 |
| 如果化合物包含一些官能團(tuán),，按照質(zhì)子官能團(tuán)確定使用下列哪種方法 | |
疏水性胺：根據(jù)初流動相得到的結(jié)果,，請按下列流程
| 保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 沒有或低異構(gòu)體選擇性，低保留時間 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 高保留時間,，無異構(gòu)體選擇性 |
| pH值或無電荷改進(jìn)劑的優(yōu)化,。 | 逐漸增加pH值，用異丙醇調(diào)整保留時間,， ↓ 檢測另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈,，甲醇，丙醇,，乙醇 ↓ 測試低濃度質(zhì)子改進(jìn)劑：辛酸1-20mM,；己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM,。 | pH降低4,，或增加異丙醇。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈,，甲醇,，丙醇，乙醇 | 測試不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑：異丙醇,，乙腈,，甲醇，丙醇,，乙醇,。 ↓ 測試低濃度質(zhì)子改進(jìn)劑：辛酸1-20mM； 己酸或庚酸1-20mM,；四乙基胺或四丙基胺1-5mM,。 |
親水性胺，弱酸,，非質(zhì)子化合物：根據(jù)初流動相得到的結(jié)果,，請按下列流程
| 保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 沒有或低異構(gòu)體選擇性，低保留時間 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 高保留時間,，無異構(gòu)體選擇性 |
| pH值或無電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化,。 | 降低異丙醇的濃度。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈,，甲醇,，丙醇，乙醇 ↓ 胺：檢測低濃度質(zhì)子改進(jìn)劑：辛酸1-20mM；己酸或庚酸1-20mM,；四乙基胺或四丙基胺1-5mM,。 | pH值逐漸減低，增加異丙醇的濃度,。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈,，甲醇，丙醇,，乙醇 | 見疏水性胺的操作流程 |
強(qiáng)酸（如羧酸）：根據(jù)初流動相得到的結(jié)果,，請按下列流程
| 保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 沒有或低異構(gòu)體選擇性，低保留時間 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 高保留時間,，無異構(gòu)體選擇性 |
| pH值或無電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化,。 | 降低pH值，增加緩沖鹽濃度到50-75mM（高濃度100mM） ↓ 試試低濃度（1-5mM）質(zhì)子改進(jìn)劑DMOA（N,，N-二甲基辛胺） | 添加異丙醇 ↓ 檢測不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈,，甲醇，丙醇,，乙醇 | 檢測不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈,，甲醇，丙醇,，乙醇 ↓ 試試低濃度（1-5mM）質(zhì)子改進(jìn)劑DMOA（N,，N-二甲基辛胺） |
AGP方法開發(fā)（MS檢測器）
| 樣品特征和初的流動相 | |
| 化合物類型 | 初流動相 |
| 疏水性化合物 | 10mM醋酸銨緩沖液，pH4.5 |
| 親水胺,，弱酸（苯酚等）,，非質(zhì)子類（胺，酯,，醇等） | 5%異丙醇的10mM醋酸銨緩沖液,，pH7.0 |
| 強(qiáng)酸（羧酸） | 10mM醋酸銨緩沖液，pH7.0 |
| 如果化合物包含一些官能團(tuán),，按照質(zhì)子官能團(tuán)確定使用下列哪種方法 | |
疏水性胺：根據(jù)初流動相得到的結(jié)果,，請按下列流程
| 保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 異構(gòu)體選擇性低或沒有,，保留時間低 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 保留時間高,，無異構(gòu)體選擇性 |
| pH值或無電荷改進(jìn)劑的優(yōu)化。 | 逐漸增加pH值,，用異丙醇調(diào)整保留時間,，（濃度越低，選擇性越高） ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈,，甲醇,，丙醇，乙醇 ↓ 測試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑：TEA（三乙基胺）1-20mM | pH降低4，或增加異丙醇,。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈,，甲醇，丙醇,，乙醇 | 測試不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑：異丙醇,，乙腈，甲醇,，丙醇,，乙醇。 ↓ 測試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑：TEA（三乙基胺）1-20mM |
親水性胺,，弱酸,，非質(zhì)子化合物：根據(jù)初流動相得到的結(jié)果，請按下列流程
| 保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 沒有或低異構(gòu)體選擇性,，低保留時間 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 高保留時間,，無異構(gòu)體選擇性 |
| pH值或無電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化。 | 降低異丙醇的濃度,。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈,，甲醇，丙醇,，乙醇 ↓ 胺：檢測低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑：TEA（三乙基胺）1-20mM | pH值逐漸減低,，增加異丙醇的濃度。 ↓ 測試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈,，甲醇,，丙醇，乙醇 | 見疏水性胺的操作流程 |
強(qiáng)酸（如羧酸）：根據(jù)初流動相得到的結(jié)果,，請按下列流程
| 保留時間和異構(gòu)體選擇性 | 沒有或低異構(gòu)體選擇性,，低保留時間 | 異構(gòu)體選擇性和保留時間都高 | 高保留時間，無異構(gòu)體選擇性 |
| pH值或無電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化,。 | 降低pH值,，增加緩沖鹽濃度到50-75mM（高濃度100mM） ↓ 測試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑 | 添加異丙醇 ↓ 測試不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈，甲醇,，丙醇,，乙醇 | 測試不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑：乙腈,，甲醇,，丙醇，乙醇 ↓ 測試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑 |
9,、保護(hù)柱的使用
為了保護(hù)分析柱不被高親和力和顆粒雜質(zhì)污染,，推薦使用保護(hù)柱，且必須定期更換保護(hù)柱,，否則將影響分析柱的性能,，用于生物分析時尤為重要。
CHIRAL-AGP,，CHIRAL-CBH，CHIRAL-HSA,，均能提供保護(hù)柱
10,、選擇適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)柱
為了優(yōu)化色譜系統(tǒng)性能，保護(hù)柱的內(nèi)徑必須和分析柱的內(nèi)徑相匹配,，每種色譜柱的保護(hù)柱內(nèi)徑必須和分析柱相匹配,，標(biāo)準(zhǔn)的保護(hù)柱套CH10.3,，適合所有內(nèi)徑的保護(hù)柱芯（2，3和4mm）
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