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葡聚糖凝膠的使用方法
閱讀：8095發(fā)布時間：2016-8-16
葡聚糖凝膠適用于天然產(chǎn)物在有機溶劑中的純化。例如：類固醇,、萜類,、脂類以及小分子多肽等，葡聚糖凝膠同時適用于分子類別非常相似的物質(zhì)的分離和工業(yè)規(guī)模的制備,，既可用于初步純化步驟,，也可以用于終精制步驟。
葡聚糖凝膠使用方法：
1. 乙醇浸泡：在室溫下,，將干粉浸泡于50-60%乙醇中少24小時,，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2. 無鹽水浸泡：室溫下,，在無鹽水中充分溶脹24小時,，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹,，然后,；
3. 鹽酸浸泡：在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時，間隙攪拌,，濾干,，水洗只中性；
4. 將溶脹好的凝膠脫氣后（真空抽濾或超聲波）根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),，注意保持濕態(tài)裝柱,，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層；
5. 上樣前平衡層析柱少3-5 個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值）,；
6. 凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整,；脫鹽時上樣量可以達到20% 的柱床體積,，柱高的選擇也與分離要求相關(guān),，柱高控制在40-50cm以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓,，應(yīng)當盡可能避免,。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1 即可,；
7. 洗脫方法：可以用無鹽水,，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化,；
8. 在位清洗（CIP）凝膠使用十次后作一次CIP,，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氫氧化鈉反向洗四個柱體積,，再以少三個柱體積平衡緩沖液再生,。
葡聚糖凝膠使用方法：
1. 乙醇浸泡：在室溫下,，將干粉浸泡于50-60%乙醇中少24小時,，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2. 無鹽水浸泡：室溫下,，在無鹽水中充分溶脹24小時,，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹,，然后,；
3. 鹽酸浸泡：在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時，間隙攪拌,，濾干,，水洗只中性；
4. 將溶脹好的凝膠脫氣后（真空抽濾或超聲波）根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),，注意保持濕態(tài)裝柱,，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層；
5. 上樣前平衡層析柱少3-5 個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值）,；
6. 凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整,；脫鹽時上樣量可以達到20% 的柱床體積,，柱高的選擇也與分離要求相關(guān),，柱高控制在40-50cm以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓,，應(yīng)當盡可能避免,。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1 即可,；
7. 洗脫方法：可以用無鹽水,，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化,；
8. 在位清洗（CIP）凝膠使用十次后作一次CIP,，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氫氧化鈉反向洗四個柱體積,，再以少三個柱體積平衡緩沖液再生,。
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