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當前位置:德祥科技有限公司>>技術文章>>重視VELP凱氏定氮儀的操作方法及維護
VELP凱氏定氮儀主要作用是用于生化試驗中,。它的工作是根據(jù)蛋白質中氮的含量恒定的原理,,通過測定樣品中氮的含量從而計算蛋白質含量的計算,。
VELP凱氏定氮儀的操作方法
一、消化
根據(jù)樣品量的多少選擇適宜的凱氏燒瓶4個(此處以50毫升為例),,其中2個為對照,。向燒瓶內加入準確稱量的樣品,注意要把樣品加至燒瓶底部,,切勿沾在瓶口及瓶頸上,。另外2個作空白對照,好對樣品進行校正,。
在每個燒瓶中加入約300毫克硫酸鉀-硫酸銅混合物(硫酸鉀:五水硫酸銅=3:1,、6:1或10:1均可),再用量筒加入3毫升濃硫酸,。將上述4個凱氏燒瓶放在通風良好處(在通風櫥中進行)加熱消化,。先用小火加熱至沸騰。此時會產(chǎn)生大量泡沫,,應特別注意不能讓黑色物質上升到燒瓶頸部,,否則將嚴重影響分析結果。當混合物停止冒泡,,蒸汽與二氧化硫也均勻地放出時,,將火焰調節(jié)到保持瓶內液體微微沸騰。假若發(fā)現(xiàn)瓶頸上有黑色顆粒,,應小心地將燒瓶傾斜振搖,,用消化液將其洗下。
在消化過程中要時常轉動燒瓶,,使全部樣品都浸在消化液中,。當消化液呈清澈淡藍色時即告消化結束,。時間一般在5~6小時!若樣品中含賴氨酸或組氨酸較多時,消化時間需要延長1~2倍,。因為這兩種氨基酸中的氮在短時間內不易消化*,。
二、蒸餾
洗滌蒸餾儀:用硼酸指示劑(取100毫升2%硼酸溶液,,滴加混合指示劑約1毫升,,搖勻后呈紫紅色即可;混合指示劑:50毫升0.1%甲烯藍乙醇+200毫升0.1%甲基紅乙醇,存于棕色瓶中)檢測是否清洗干凈,。干凈標準:指示劑不變色,。
樣品和空白的蒸餾:取2毫升稀釋消化液至加樣口加入反應室,關閉加樣口,,另取1個裝硼酸指示劑的三角瓶接于冷凝管下端,。取30%氫氧化鈉(W/W)溶液約10毫升,從加樣口緩慢加入,,當未加完時關閉,,并加入約3毫升蒸餾水,再繼續(xù)緩慢加入一半后關閉,,讓剩下的水作液封,。將加熱器重新放在蒸汽發(fā)生器下加熱(注:在清洗儀器完畢后應拿走加熱器),待三角瓶中液體由紫紅變成鮮綠色起開始計時,,蒸餾5分鐘,,然后移動三角瓶使液面離開冷凝管口約1厘米,并用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外周,,繼續(xù)蒸餾1分鐘,。空白同樣,。
清洗儀器,,同上,不*指示劑,。
三,、滴定
用0.0100mol/L標準鹽酸(要標定,費時)滴定三角瓶中收集的氨,,直至硼酸指示劑由綠變紫紅,。
VELP凱氏定氮儀的維護方法
1、定期清洗VELP凱氏定氮儀,,對排廢裝置進行清洗,,長時間不清洗,會堵塞管路。量取25ml醋酸溶液和5ml水,,采用手動蒸餾半小時,,揮發(fā)的醋酸將清除排廢裝置內壁上殘留的堿液。
2,、維修當排廢裝置堵塞后,,一般為廢液缸下方的電磁閥內被炭化的顆粒堵塞。關閉儀器電源開關,,打開儀器后蓋,,取下電磁閥,拆開后清除內部廢渣后并安裝,。
3,、在每次更換完標準滴定酸或接收液后,以及對儀器進行維修后,,都要對VELP凱氏定氮儀進行回收率的測定。一般采用硫酸銨進行回收率分析,,保證回收率在99.5%-100.5%的范圍之內,,說明VELP凱氏定氮儀正常,可以進行樣品測定,。
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