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液相色譜儀常見故障及應(yīng)對措施
液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用液相色譜原理,，主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的,、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。它由儲液器,、泵,、進(jìn)樣器、色譜柱,、檢測器,、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運(yùn)動時,，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程,，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,，通過檢測器時,，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來,。HPLC廣泛應(yīng)用于生命科學(xué),、食品科學(xué),、藥物研究以及環(huán)境研究中,。
液相色譜是應(yīng)用多的色譜分析方法，液相色譜系統(tǒng)由流動相儲液體瓶,、輸液泵,、進(jìn)樣器、色譜柱,、檢測器和記錄器組成,，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整,。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn),；進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利切換嚴(yán)密；由于液體流動相粘度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣體,，為了減低柱壓液相色譜的色譜柱一般比較粗,，長度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。HPLC應(yīng)用非常廣泛,，幾乎遍及定量定性分析的各個領(lǐng)域,。
使用液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱,，通過壓力在固定相中移動,，由于被測物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同，不同的物質(zhì)順序離開色譜柱,，通過檢測器得到不同的峰信號,，后通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質(zhì)。液相色譜作為一種重要的分析方法,，廣泛的應(yīng)用于化學(xué)和生化分析中,。液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒有本質(zhì)的差別，它的特點(diǎn)是采用了高壓輸液泵,、高靈敏度檢測器和微粒固定相,，適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機(jī)化合物,。
液相色譜儀常見故障及應(yīng)對措施：
1,、柱壓高
原因：緩沖液鹽分沉積于柱內(nèi);或者是樣品污染沉積。
措施：如果是緩沖液鹽分沉積于柱內(nèi),，則用40～50℃的純水低速正向沖洗柱子,，逐漸提高流速沖洗，柱壓大幅度下降后再用常溫純水清洗,，*后用純甲醇沖洗柱子30分鐘,。
如果是樣品污染沉積導(dǎo)致，則用純水反向沖洗柱子,，再用甲醇沖洗,，隨后用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子，再用甲醇沖洗,，然后用純水沖洗,，*后用甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘。
2,、氣泡溢出
原因：主要是由于過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),，內(nèi)部霉菌繁殖形成菌團(tuán)阻塞了過濾器導(dǎo)致。
措施：將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,，利用超聲清洗既分鐘,。或者將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時,，再用純水清洗,，打開purge鍵清洗脫氣，直到?jīng)]有氣泡冒出,。打開泄壓閥,，打開泵，純水沖洗過濾器1小時左右,。
3,、無壓力指示，也無液體流過
原因：泵密封墊圈磨損;或大量氣泡進(jìn)入泵體,。
措施：更換密封墊圈,，或用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
4,、壓力波動大,，流量不穩(wěn)定
原因：系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物。
措施：觀察流動相的量,，動相要充分脫氣,。如果是單向閥和閥座不能密封,，則拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
5,、峰面積重復(fù)性不佳
原因：進(jìn)樣閥漏液;或加樣針不到位,，或者是液量不足。
6,、出峰不佳,，峰分叉
原因：色譜柱被污染，或者柱頭填料塌陷,。
措施：色譜柱被污染則需清洗色譜柱,。如果柱頭填料塌陷或硬結(jié)，則去除硬結(jié)部分,，沖新裝入新填料,。反復(fù)滴甲醇，壓緊不銹鋼桿,，直至填滿,。柱頭用甲醇沖洗干凈,。