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選液相色譜柱了解這些才能少走冤枉路
現(xiàn)代液相色譜分析中,，色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞，選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發(fā)所需的時(shí)間,，并且使方法更具穩(wěn)定性,。
這里為大家提供一個(gè)液相色譜柱選擇的簡(jiǎn)單思路：
1.確定分離目的確定你的應(yīng)用是否要求高分離度、短分析時(shí)間,、高靈敏度,、長(zhǎng)柱壽命，低的實(shí)驗(yàn)成本等,。
2.評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)諸如化學(xué)結(jié)構(gòu),、溶解性、穩(wěn)定性等。
3.選擇合適的色譜柱了解色譜填料的物理和化學(xué)性質(zhì),。
想要選適合的液相色譜柱,，你需要先詳細(xì)了解它。這樣才能少走冤枉路,！
液相色譜柱的參數(shù)——物理性質(zhì)
柱長(zhǎng),，內(nèi)徑，如250*4.6mm,。
長(zhǎng)度的選擇：柱越長(zhǎng),，總柱效越高（n值越大），柱越長(zhǎng),，分析時(shí)間也越長(zhǎng),。250—300mm是普遍的柱長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子,，一般用來(lái)分離l0到50個(gè)組份的中等至復(fù)雜混合物,；500—600mm，要求較高分辨率的應(yīng)用,，—般用來(lái)分離大于50個(gè)組份或包含有難分離物質(zhì)的復(fù)雜樣品程序升溫分析,。
內(nèi)徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內(nèi)徑越小柱效越高,，但內(nèi)徑越大,，柱容量也增加，允許進(jìn)樣量就越多,。當(dāng)進(jìn)樣量超過(guò)柱容量時(shí),，則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡，將會(huì)導(dǎo)致色譜蜂畸變,，柱分辨率降低,，重現(xiàn)性不好。因此對(duì)于復(fù)雜樣品需要準(zhǔn)確分離,，應(yīng)使用小內(nèi)徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物,，為了增加樣品容量就應(yīng)使用內(nèi)徑大的柱子,，目前實(shí)驗(yàn)室使用常見(jiàn)的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm。
一般選擇原則：分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱,；對(duì)于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱,，以改善峰形，延長(zhǎng)色譜柱使用壽命等,。
粒徑,，影響色譜分離度。
粒徑越小柱效越高,、分離度越高,，但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致較高柱壓降,。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品，UPLC可以使用1.5μm的填料,；另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱,。
孔徑和比表面積
孔徑，60A,，120A,，300A等?？讖叫?，則含孔率高，比表面積大,，載碳量高,；色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配，保證分子自由進(jìn)出填料孔并與孔內(nèi)表面的鍵合相進(jìn)行分離分配,，通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上,，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A,。
比表面積,，指的是每克填料的表面積，如180m2/g—350m2/g,，與粒度和含孔率有關(guān),；比表面積大，會(huì)增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng),，增加保留和分離度,；比表面積小則可以縮短分析時(shí)間和平衡時(shí)間，并不是比表面積大或者小就更好,，需要選擇合適的比表面積,。
孔容和機(jī)械強(qiáng)度
孔容，又稱“孔體積”,。指單位顆粒的空隙體積大小,。它能很好的反應(yīng)填料的機(jī)械強(qiáng)度?？左w積大的填料相對(duì)孔體積小的填料機(jī)械強(qiáng)度要略弱,。孔體積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離,，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜,。
液相色譜柱的參數(shù)--化學(xué)性質(zhì)
填料基質(zhì)
硅膠基質(zhì)：純度高本錢低，強(qiáng)度大，化學(xué)修飾輕易,，但pH值范圍有限,。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定，但經(jīng)過(guò)特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10,。
聚合物基質(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬,，溫度穩(wěn)定（高溫可以達(dá)到80度以上），機(jī)械強(qiáng)度小,。
含碳量
含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例,，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。高含碳量進(jìn)步柱容量,、分辨率及分析時(shí)間,，用于要求高分離度的復(fù)雜樣品；低含碳量分析時(shí)間短,、展現(xiàn)不同的選擇性,，用于快速分析簡(jiǎn)單樣品及需要高含水活動(dòng)相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等,。
鍵合相
鍵合試劑不同,，對(duì)化合物的選擇性不同，一般長(zhǎng)鏈的烷基鍵合相（C18 C8）比短鏈的（C4 C3）穩(wěn)定,；非極性的鍵合相比極性的鍵合相（-NH2）穩(wěn)定,。
封端
封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對(duì)封端鍵合相會(huì)產(chǎn)生不同的選擇性,，尤其是極性樣品,。
正相—反相色譜對(duì)比
液相色譜柱有正相和反相之分。目前市場(chǎng)上主要以反相色譜為主,，約占80%的比例,。
現(xiàn)在市面上的液相色譜柱琳瑯滿目，了解色譜柱的參數(shù)可以讓我們有一個(gè)初步的選擇,，但由于各個(gè)儀器廠商的填料技術(shù)和鍵合技術(shù)仍有差異,，即使都是C18柱，同一品牌不同系列都有不同的功能,，有能耐受低pH值的,、有耐高溫的、有適合堿性樣品的等等,。所以在選擇色譜柱前要好好研究色譜柱參數(shù),，仔細(xì)閱讀色譜柱說(shuō)明書,，才能找到合適的色譜柱和適宜的分離方法,。