葉綠色的測定方法步驟
測定葉綠素的主要步驟如下:
(1)過濾:
抽濾前加入碳酸鎂懸濁液防止色素分解,。負(fù)壓不能超過50kPa,。
(2)葉綠素的提取:
先研磨,,將濾膜放置于組織研磨器中,,加入4-5ml 的90%丙酮溶液,500r/min 研磨3min,。破碎濾膜上浮游植物藻類細(xì)胞,。
然后浸泡提取:將破碎后的細(xì)胞提取液轉(zhuǎn)移至15ml 離心管中,,用90%丙酮溶液沖洗研磨器及研磨杵一并轉(zhuǎn)入離心管,,定容至10ml?;靹蚝?℃暗處浸泡提取,。浸泡時間為15min 至24h,。過程中要顛倒混勻數(shù)次,。
最后離心澄清:1000g 離心20min 或過濾,將上清液轉(zhuǎn)移至旋塞玻璃小瓶中,。
(3)測定方法:
分光光度法,,三色方程測定664nm、647nm,、630nm,、750nm 吸光度計(jì)算葉綠素a、b、c 葉綠素含量,。單色方程測定脫鎂葉綠素a 校正后的含量,。