在進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測的過程中，技術(shù)人員常面臨各種挑戰(zhàn)與疑問,，為解決這些問題,，科德角國際匯總了客戶咨詢的常見問題，并以詳盡的問答形式提供了指導(dǎo)性的解答,，為相關(guān)從業(yè)者提供參考,。

一、如何溶解細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品,？

對于不同類型的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品,，其溶解方法有所不同。

??美國藥典USP細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品（USP-RSE）：加入5mL細(xì)菌內(nèi)毒素檢測用水（2000EU/mL）,，再劇烈渦旋30分鐘,。

??科德角國際歐洲藥典細(xì)菌內(nèi)毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品（BRP）：將5mL細(xì)菌內(nèi)毒素檢測用水添加到小瓶中。使用渦旋混合器間歇混合30分鐘以復(fù)溶,，以獲得初始濃度2000EU/mL的儲備溶液,。

▲歐洲藥典細(xì)菌內(nèi)毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品

??科德角國際ACC細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE-E0005）：加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢測用水使細(xì)菌內(nèi)毒素初始濃度達(dá)到1000EU/mL（具體濃度參考試劑CoA），劇烈渦旋1分鐘,，靜置5分鐘,，重復(fù)5次以充分溶解。

▲細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）

二,、中國藥典下的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品選擇

在中國藥典的規(guī)定下,，進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測時應(yīng)使用藥典規(guī)定的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，包括USP-RSE,、EP-BRP,、CSE以及中國食品藥品檢定研究院的細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品。

三,、凝膠法,、濁度法、顯色法的區(qū)別

凝膠法主要用于半定量分析,，而顯色法和濁度法則用于定量分析,。

顯色法和濁度法雖然大體相似，但在檢測原理,、檢測波長,、檢測試劑,、檢測范圍以及檢測成本上均存在差異，因此在選擇這兩種方法之前,，需要根據(jù)實(shí)際需求進(jìn)行審慎而合理的考量,。

當(dāng)凝膠法、顯色法和濁度法的檢測結(jié)果出現(xiàn)疑問或爭議時,，應(yīng)以凝膠法的結(jié)果作為最終的判定依據(jù),。

四、檢測時必須使用檢測專用耗材嗎,？

在進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測時,，雖然不必使用專用的檢測耗材，但必須使用不含細(xì)菌內(nèi)毒素或β-葡聚糖的器具,。

玻璃器具可通過超過250℃的干熱滅菌30分鐘以上來滅活細(xì)菌內(nèi)毒素,，同時需避免使用可能釋放微量金屬離子（如Fe、Al,、Ga,、Cr等）影響檢測結(jié)果的金屬器具。

此外,，對于一次性塑料器具,，除需獲得生產(chǎn)商的保證外，還應(yīng)確認(rèn)其不受細(xì)菌內(nèi)毒素污染,、不吸附細(xì)菌內(nèi)毒素,，且洗脫物不含影響檢測結(jié)果的物質(zhì)。

五,、胃腸道外給藥細(xì)菌內(nèi)毒素的限值確定

對于藥典中未規(guī)定細(xì)菌內(nèi)毒素限值的樣品,，其限值公式如下：

內(nèi)毒素限值(EU/mL)= K值(EU/kg)/人最大給藥量(mL/kg)

其中，K值根據(jù)給藥途徑的不同而有所差異,。

頻繁或連續(xù)注射時,，人最大給藥量為1小時內(nèi)注射的最大劑量。

??參考

日本,、美國,、歐洲藥典規(guī)定的K值（致熱細(xì)菌內(nèi)毒素量）

六,、如何計算MVD（最大有效稀釋率）？

計算公式如下：

?? λ：凝膠法中表示鱟試劑的標(biāo)示靈敏度,，光度法中表示細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍的最小濃度,。

此外,，科德角國際的Pyros Kinetix® Flex細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測系統(tǒng)配套軟件“PEXS"帶有MVD自動計算功能，方便用戶進(jìn)行快速準(zhǔn)確的計算,。

▲Pyros Kinetix® Flex細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測系統(tǒng)

七,、不溶于水的樣品檢測？

對于不溶于水的樣品,，如果能溶于1%乙醇或1%DMSO,，在進(jìn)行檢測時不會對鱟試劑造成影響。

八,、樣品保存方法,？

保存樣品時需注意以下幾點(diǎn)：

● 確保樣品中無活菌繁殖；

● 細(xì)菌內(nèi)毒素值不會隨保存期而發(fā)生變化,；

● 確保保存容器無細(xì)菌內(nèi)毒素污染,，無細(xì)菌內(nèi)毒素吸附，不含影響檢測結(jié)果的洗脫物,。

九,、如何調(diào)節(jié)樣品的pH值？

如果樣品溶液的pH值不在6.0～8.0范圍內(nèi),，則需要進(jìn)行調(diào)節(jié)以確保檢測準(zhǔn)確性,。細(xì)菌內(nèi)毒素檢測的最佳pH值約為7.3，但由于鱟試劑中含有緩沖成分,，此該檢測在pH6.0至8.0的范圍內(nèi)均可進(jìn)行,。

對于可稀釋的樣品，可通過稀釋來調(diào)整pH值,；對于不可稀釋的樣品,，則可在樣品溶液中加入稀NaOH或HCl溶液來調(diào)節(jié)pH值。

此外,，也可利用緩沖液來稀釋樣品溶液,。為確保調(diào)節(jié)效果，建議使用按需配制的NaOH或HCl溶液來調(diào)整pH值,。

十,、檢測用試管可重復(fù)使用嗎？

檢測用試管不可重復(fù)使用,。稀釋或樣品保存用試管可在進(jìn)行250℃超過30分鐘的干熱滅菌后重復(fù)使用,。