一,、鱟試劑靈敏度的復核

為了保證檢查細菌內(nèi)毒素結果的準確性，用于實驗的鱟試劑應首先核對靈敏度,。因為實際工作中,，發(fā)現(xiàn)鱟試劑均符合藥典規(guī)定標準前提下，由于生產(chǎn)廠家不同,，部分鱟試劑的實測靈敏度與標示值有差異而導致檢測同一檢品時,，用相同標示值的鱟試劑，出現(xiàn)不同結果,。鱟試劑靈敏度的復核是使用該鱟試劑的前提,。中國藥典(2000版)在靈敏度復核項下規(guī)定,只有當實測值λc在0.5λ~2.0λ(包括0.5λ和2.0λ)時，方可用于細菌內(nèi)毒素檢查，并以λ為該批試劑的靈敏度,，同時要求所用鱟試劑的靈敏度須小于供試品的內(nèi)毒素限值,，因此靈敏度的準確與否直接關系到判斷結果的正誤，應盡量選用測定值與標示值一致(λc =λb)的鱟試劑,。有報道,，用符合藥典規(guī)定的靈敏度標示值相同的鱟試劑檢測同一檢品，結果因鱟試劑實測值與標示值間存在差異而出現(xiàn)了兩種*不同的結果,。因而先核對靈敏度可避免因鱟試劑本身造成的判斷失誤,。

二、供試品的稀釋

在取樣品時,，要熟悉中國藥典的內(nèi)容,，不能直接取大輸液原液0.1ml進行檢查，這是排除干擾因素的簡單有效的方法,。因藥典已明確規(guī)定實驗中鱟試劑的靈敏度不超過0.5EU/ml,，根據(jù)供試品的稀釋公式:

供試品稀釋倍數(shù)=L/λ

L:供試品的內(nèi)毒素*

λ:鱟試劑靈敏度的標示值(EU/ml)。

故檢測大輸液均應稀釋后才能進行實驗,，如選用更高靈敏度的鱟試劑,，則應增加樣品的稀釋倍數(shù)。稀釋用的細菌內(nèi)毒素檢查用水藥典作了規(guī)定,。在4h內(nèi)不得與鱟試劑產(chǎn)生凝集反應,。如果直接用供試品原液實驗，就會使供試品的內(nèi)毒素要求提高到0.5EU/ml或0.5EU/ml 以下,，這樣,，根據(jù)目前大輸液的生產(chǎn)和貯藏條件，有些就會達不到,，鱟法檢出的陽性率會提高,，兔法復核的機遇也將增多，勢必會浪費人力物力,。

以前細菌內(nèi)毒素的限值是按照熱原檢查法所需的家兔劑量計算的,，由于家兔劑量往往高于人用最大劑量的幾倍甚至幾十倍，勢必造成對產(chǎn)品內(nèi)毒素要求過于嚴格,，使很多合格產(chǎn)品被判為不合格產(chǎn)品或使藥品生產(chǎn)成本增加,，所以在USP和EP中，相繼采用人用最大劑量來計算藥品細菌內(nèi)毒素的限值,。如注射用頭孢噻肟鈉按中國藥典(1995版)規(guī)定的熱原劑量計算其細菌內(nèi)毒素限值,，與USP的限值要求相差4倍，而用最大劑量計算則兩者十分接近,。

三,、混合液的pH值

供試液與益試劑混合液的pH值對鱟實驗的影響較大,，根據(jù)國內(nèi)外資料的報道，實驗的最適pH為6.25~7.25才能形成最佳凝膠,。鱟試劑本身具有一定的緩沖能力,。但pH值過大或過小均可抑制鱟試劑與細菌內(nèi)毒素的反應，其原因可能是pH值過大或過小均可破壞極微量的內(nèi)毒素,。

四,、保溫溫度

溫度對鱟試劑的靈敏度影響很大，保溫溫度在25~40℃之間,，隨著溫度的升高,，鱟試劑的靈敏度亦增大，在40~46℃之間,，溫度對益試劑的靈敏度無明顯影響,，達到49℃或更高溫度時，則會破壞鱟試劑,。故應嚴格按照藥典的要求,，溫度控制在(37士1)℃之間，才可獲得理想的結果,。

五、振動的影響

鱟試劑與細菌內(nèi)毒素形成的凝膠受到振動后易變形而誤判為陰性,。因此,，在鱟實驗過程中，不宜進行容易引起試管振動的實驗操作,，實驗用的試管架的眼孔直徑應與安瓿或試管直徑相接近,，避免安瓿或試管左右晃動。水浴箱要放置在固定不易受到振動的地方,，保溫過程中不可隨時取出觀察,。

六、所用器皿的影響

所用器皿均應*洗凈和滅菌,，實驗用器皿均應充分洗滌并沖洗干凈,，特別是接觸酸堿或用洗衣粉、洗液等洗滌后,，更應沖洗干凈,，以免殘留物破壞極微量的內(nèi)毒素。滅菌應按藥典中的有關方法處理,，防止引入外源性內(nèi)毒素,。如有條件的話可用合格的細菌內(nèi)毒素快檢盒。

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本文節(jié)選自：《細菌內(nèi)毒素檢測中問題的研究》,，文章作者：岳麗娜,。如有侵權,，請聯(lián)系刪除，謝謝,！