牛蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA試劑盒
- 公司名稱 北京索萊寶科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地 美國
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2024/7/14 13:00:35
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中文名稱:牛蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA試劑盒
操作程序:
① 加抗體包被 → 4℃過*,,洗滌三次、拋干
② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘,,洗滌三次、拋干
③ 加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 30分鐘,,洗滌三次,、拋干
④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘,,加終止液
⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值
牛蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA試劑盒顯色的重要性
顯色是ELISA中的后一步溫育反應(yīng),此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物,。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素,。在一定時間內(nèi),陰性孔可保持無色,,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強,。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中,,加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,。定性測定的顯色可在室溫進行,時間一般不需要嚴格控制,,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間,,及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,,再延長反應(yīng)時間,,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進行,,顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用酸終止后,,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色,。
TMB受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺上,,邊反應(yīng)觀察結(jié)果,。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果,。TMB經(jīng)HRP作用后,,約40分鐘顯色達,隨即逐漸減弱,,2小時后即可*消退無色,。TMB的終止液有多種,疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止,。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪,,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。
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