注意事項：轉化前請準確查找該質粒相應的抗生素名稱,、抗生素使用濃度,、感受態(tài)名稱和培養(yǎng)溫度。

1,、收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min,，再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0 的 1*TE緩沖液來溶解質粒，室溫放置1min,；

2,、從-80℃冰箱中取出相應的感受態(tài)，置于冰盒上解凍,，并做好標記,；

3、取2μl質粒加至100μl感受態(tài)中,，冰浴30min,；

4、42℃熱激90s,，再冰浴2min,；

5、加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基,，180rpm震蕩培養(yǎng)45min,；

6、6000rpm離心5min,，僅留100ul上清混勻菌體沉淀,；

7、混勻后的菌液加至對應抗性的LB平板上，倒入適量玻璃珠,，涂勻液體,；

8、將平板正向培養(yǎng)1h,，再倒置培養(yǎng)12h~16h,；

9、挑取單克隆菌落至對應抗性的LB液體培養(yǎng)基中,，震蕩培養(yǎng)12h~16h,，根據(jù)實驗需要提取質粒