BD Pharmingen白細(xì)胞活化混合物試劑通過細(xì)胞內(nèi)染色檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞內(nèi)積累的最關(guān)鍵步驟是分離和激活細(xì)胞群以誘導(dǎo)產(chǎn)生目標(biāo)細(xì)胞因子,。如果沒有在蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運抑制劑存在下培養(yǎng)的適當(dāng)激活的產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞,，在大多數(shù)情況下檢測細(xì)胞因子細(xì)胞內(nèi)積累的能力會受到嚴(yán)重?fù)p害。據(jù)報道,，刺激細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的各種體外方法,。多克隆激活劑對于誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞特別有用。這些激活劑包括：伴刀豆球蛋白 A、脂多糖,、佛波酯加鈣離子載體或離子霉素,、植物血凝素、葡萄球菌腸毒素 B 和針對 TCR/CD3 復(fù)合物亞基的單克隆抗體（有或沒有針對共刺激受體的抗體,，如 CD28）,。

含BD Pharmingen白細(xì)胞活化混合物試劑是一種即用型多克隆細(xì)胞活化混合物，含有佛波酯,、PMA（佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯）,、鈣離子載體（離子霉素）和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運抑制劑 BD GolgiPlug™ （Brefeldin A）。這種混合物可用于從 T 細(xì)胞引發(fā)原發(fā)性細(xì)胞因子反應(yīng),。使用這種混合物刺激細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞因子產(chǎn)生,，細(xì)胞因子位于產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中。細(xì)胞因子的這種定位是由蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運抑制劑成分 Brefeldin A 引起的,，它阻斷了細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運過程,。因此，細(xì)胞中細(xì)胞因子蛋白水平積累的增加增強了免疫熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)分析對產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞的可檢測性,。每 100 μL 樣品瓶的內(nèi)容物足以處理多達 50 mL 的細(xì)胞培養(yǎng)物（~10^6 個細(xì)胞/mL）;因此可以刺激 ≥ 5 × 10^7 個細(xì)胞,。

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