cas：149838-22-2,，F(xiàn)M 1-43是一種廣泛應用于神經(jīng)科學和細胞生物學研究的熒光探針，其核心特性,、應用場景及操作要點如下：

化學本質(zhì)與基本性質(zhì)

• 化學名稱：N-(3-三乙基銨丙基)-4-(4-(二丁基氨基)苯乙烯基)吡啶二溴鹽

• 分子量：611.54 g/mol

• CAS號：149838-22-2

• 外觀：橙色至紅色固體

結(jié)構(gòu)式：

• 溶解性：

• 水溶性：可溶于水，但需注意吸濕性（建議使用新開封的DMSO助溶）,。

• 有機溶劑：易溶于DMSO（溶解度可達50 mg/mL,，需超聲助溶并控制溫度<60℃）。

• 儲存條件：

• 短期：4℃密封避光保存（避免反復凍融）,。

• 長期：-80℃保存（6個月內(nèi)使用）,，-20℃保存（1個月內(nèi)使用）。

熒光特性

• 激發(fā)/發(fā)射波長：

• 溶劑中：Ex 480 nm,，Em 626-636 nm（橙紅色熒光）,。

• 膜結(jié)合后：Em 565-590 nm（黃色熒光，Stokes位移大,，需長通發(fā)射濾光片）,。

• 熒光行為：

• 水溶液中幾乎不發(fā)光,，插入細胞膜后熒光顯著增強。

• 膜結(jié)合后熒光光譜藍移,，便于與背景信號區(qū)分,。

核心應用場景

1. 神經(jīng)科學研究：

• 突觸囊泡循環(huán)：標記主動釋放神經(jīng)遞質(zhì)的神經(jīng)元，通過內(nèi)化進入可回收突觸囊泡,，實現(xiàn)神經(jīng)末梢高亮度染色,。

• 機械轉(zhuǎn)導通道研究：作為毛細胞機械傳遞通道的滲透阻滯劑，用于耳毒性機制研究（如降低氨基糖苷類抗生素的耳毒性）,。

• 活性依賴性機制：結(jié)合KCl刺激法,，動態(tài)追蹤突觸小泡的釋放與回收。

2. 細胞生物學研究：

• 細胞膜通透性檢測：通過熒光強度反映細胞膜的通透性和流動性,。

• 膜電位研究：敏感反映細胞膜電位變化,，用于檢測神經(jīng)細胞興奮性和離子通道功能。

3. 成像技術(shù)兼容性：

• 適用于熒光顯微鏡,、共聚焦顯微鏡,、流式細胞儀、微孔板讀數(shù)儀等設(shè)備,。

實驗操作要點

1. 工作液配制：

• 儲備液：用DMSO配制5 mM儲備液（需超聲助溶）,。

• 工作液：用預熱HBSS溶液稀釋至5-20 μM（現(xiàn)用現(xiàn)配）。

2. 細胞標記流程：

• 懸浮細胞：

• 貼壁細胞：

1. 培養(yǎng)于無菌蓋玻片上,，移除培養(yǎng)基后加入100 μL染料工作液,。

2. 孵育5-30分鐘后，用培養(yǎng)基洗滌2-3次,，成像觀察,。

3. 離心收集細胞，PBS洗滌兩次,。

4. 加入1 mL FM 1-43工作液,，室溫孵育5-30分鐘。

5. 離心棄上清,，PBS洗滌兩次后重懸,，用于成像。

3. 非特異性染色去除：

• 標記后通過洗滌（如PBS或培養(yǎng)基）輕松去除細胞表面非特異性結(jié)合的染料,。

4. 固定樣本處理：

• 若需固定樣本,，選擇FM 1-43FX（醛類固定劑兼容版本），避免普通FM 1-43在固定過程中丟失信號,。

注意事項

• 毒性：對細胞無毒,，但需避免反復凍融導致降解。

• 避光操作：熒光探針對光敏感，所有步驟需在避光條件下進行,。

• 設(shè)備兼容性：使用典型熒光素（如FITC）或GFP光學濾光片組,，但需注意其發(fā)射光譜與四甲基羅丹明（TRITC）濾光片不兼容。

cas：149838-22-2,，F(xiàn)M 1-43

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