室溫避光

1.有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期,。
2.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

一年

顯微鏡

1. 石蠟切片
2. 冰凍切片
3. 細(xì)胞

1.顯微鏡
2.移液器
3.吸頭

1. 4%多聚甲醛,、70%乙醇和95%乙醇,。如需脫水,、透明和封片處理，還需自備二甲苯,，中性樹膠或其它封片劑,。
2. 如樣品是石蠟切片，需自備90%乙醇,，無水乙醇以及二甲苯,。

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

1. 次使用本試劑時(shí)建議先取1-2個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
2. 染色時(shí)間根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整,。
3. 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈,。系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。
4. 鹽酸乙醇分化時(shí)間應(yīng)根據(jù)切片厚薄,、組織類別以及新舊而定,，另外分化后自來水沖洗時(shí)間應(yīng)該足夠，以便清洗酸,。
5. -乙醇混合固定液是由和95%乙醇等量混合而得,，再加入適量乙酸，密閉保存,。藍(lán)化液常使用0.2～1%氨水或Scott促藍(lán)液或0.1～1%溶液,。
6. 冷凍切片染色時(shí)間盡量要短。

1. 樣品處理
石蠟切片：
二甲苯中脫蠟10-15分鐘,。
換用新鮮的二甲苯,，再脫蠟10-15分鐘。
無水乙醇5分鐘,。
90%乙醇2分鐘,。
70%乙醇2分鐘。
30%乙醇2分鐘,。
蒸餾水2分鐘,。

冰凍切片：
回溫后的切片蒸餾水30秒-2分鐘。
-乙醇混合固定液固定,。
自來水沖洗 ,。

培養(yǎng)細(xì)胞：
用4%多聚甲醛固定10分鐘以上。
蒸餾水洗滌2分鐘,。
換用新鮮的蒸餾水,，再洗滌2分鐘。

2. 2.1蘇木素染色
上述處理好的樣品：
染色5-10分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時(shí)間),。
自來水中流水沖洗去多余的染色液,，約30-60秒。
蒸餾水再洗滌一遍(數(shù)秒鐘)。
(可選步驟,，可不做) 鹽酸乙醇分化,。自來水沖洗。藍(lán)化液返藍(lán),。自來水沖洗
（可接著直接入伊紅染液染色,。）
即可直接觀察， 顯微鏡下觀察,，細(xì)胞核呈藍(lán)紫色,。
如果用于免疫組化等染色后的復(fù)染，可以參考上述步驟在其它染色完成后直接進(jìn)行蘇木素染色,。

2.2伊紅染色
上述處理好的樣品：
用蒸餾水浸潤(rùn)組織1-2分鐘,，確保蒸餾水覆蓋整個(gè)組織，使水分均勻分布,。
伊紅染色液染色30秒-2分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時(shí)間),。
70%乙醇洗滌2次后即可直接觀察或者繼續(xù)按后續(xù)步驟進(jìn)行脫水、透明,、封片,。
脫水，透明,，封片后鏡檢,。
如果用于免疫組化等染色后的復(fù)染，可以參考上述步驟在其它染色完成后直接進(jìn)行伊紅染色,。顯微鏡下觀察，細(xì)胞漿呈紅色,。

染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色,；細(xì)胞質(zhì)、肌纖維,、膠原纖維,、甲狀腺膠質(zhì)等呈深淺不一的紅色；角蛋白,、紅細(xì)胞等呈明亮的橙紅色,。

3. 脫水、透明,、封片或進(jìn)行其它染色
脫水,、透明、封片：
95%乙醇脫水2分鐘,。
換用新鮮的95%乙醇再脫水2分鐘,。
二甲苯透明5分鐘。
換用新鮮的二甲苯，再透明5分鐘,。
用中性樹膠或其它封片劑封片,。

其它染色：
如果進(jìn)行免疫熒光染色，或進(jìn)行Hoechst等熒光染料的染色,，在蘇木素或伊紅染色液染色后：
70％乙醇洗滌2次,，每次2分鐘。
PBS或生理鹽水或TBS或TBST等用于免疫染色或熒光染料染色的溶液浸泡5分鐘,。
然后就可以進(jìn)行免疫熒光染色或其它熒光染料的染色了,。