NE-4C 小鼠神經(jīng)干細胞

細胞介紹

該細胞來源于p53基因敲除的第9天小鼠胚胎的腦泡,。據(jù)報道視黃酸可誘導NE-4C細胞系分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞。

細胞特性

1） 來源：小鼠 胚胎 腦

2） 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況,。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的專用培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理,。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。                      

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1） 準備MEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL專用培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，專用培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。 

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的專用培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例,；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù),，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清,。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱,、代數(shù)、日期等信息,。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜,，之后轉入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。

上海語純生物科技有限公司,，是由具有優(yōu)良生命科學、生物技術背景人員共同創(chuàng)辦的技術企業(yè),。公司專注于原代細胞,、腫瘤細胞及細胞培養(yǎng)相關試劑產(chǎn)品,，為高校、食品,、醫(yī)藥,、生物研究等領域提供相關技術支持和服務,。

公司自成立以來通過不斷地科技創(chuàng)新，產(chǎn)品研發(fā),，已為客戶提供定制化細胞產(chǎn)品以及完整的細胞培養(yǎng)解決方案,，通過積極地探索,、研發(fā)、深化和豐富產(chǎn)品,，目前基礎培養(yǎng)基產(chǎn)品種類多達200多種,，細胞系300多種,，原代細胞接近600種,。我們始終以“發(fā)展科學技術，關愛公眾生命健康”為動力,，通過技術創(chuàng)新,，廣泛吸納高科技人才,，不斷完善產(chǎn)品體系、豐富產(chǎn)品鏈,，積極拓展市場,，擴充應用領域,，，建立了具有市場競爭力的“語純”品牌,。

注意事項

1,、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套及口罩操作,；

2,、為保持本產(chǎn)品的優(yōu)良使用效果，請務必按照建議的儲存條件進行保存,；

3、本產(chǎn)品僅供科學研究或進一步生產(chǎn)使用,，不可用于臨床診斷或治療,。

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