EA.hy926人臍靜脈細胞融合細胞
背景描述在PEG脅迫下,，將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細胞與抗硫鳥嘌呤的A549克隆株融合,，構(gòu)建了人臍靜脈細胞株, EA.hy926。融合子在HAT培養(yǎng)基上生長并以八因子相關(guān)抗原篩選。EA.hy926已經(jīng)過100次以上的群體倍增(PDLs),。電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細胞質(zhì)分布以及組織特異性的細胞器,，分化的內(nèi)皮細胞特性如血管生成，體內(nèi)平衡/血栓形成,，血壓及炎癥反應,。 [PubMed: 6407019]
培養(yǎng)條件準備DMEM (含NaHCO3 1.5g/L）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗1%。
氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%
細胞特征來源：體細胞融合細胞
形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣,，貼壁生長
凍存條件無血清凍存液,。
細胞檢測不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等
供應限制僅供科研使用
運輸方式常溫或凍存（T25瓶或者1mL凍存管包裝）
注意事項細胞接收后的處理：
1）收到細胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù),。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況,。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的專用培養(yǎng)基6-8mL,，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收,。
1）凍存細胞的復蘇：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL專用培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，專用培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：
1.吸去培養(yǎng)液，加PBS清洗1-2遍,，去PBS,。加入0.25%胰酶2ml消化15秒，去胰酶,。將培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱,，靠殘余胰酶繼續(xù)消化細胞3-10分鐘直至細胞變圓（每3分鐘觀察一次。）
2.加12ml專用培養(yǎng)基,，吹打均勻,，即可分到2個T25培養(yǎng)瓶里。（細胞1傳2,，若顧客使用培養(yǎng)皿或培養(yǎng)孔板,，建議先包被）
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例,；
1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度,。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2.1000rpm離心3-5min,，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,，標注好名稱、代數(shù),、日期等信息,。
3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。
備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。
上海語純生物科技有限公司，是由具有優(yōu)良生命科學,、生物技術(shù)背景人員共同創(chuàng)辦的技術(shù)企業(yè),。公司專注于原代細胞、腫瘤細胞及細胞培養(yǎng)相關(guān)試劑產(chǎn)品,，為高校,、食品、醫(yī)藥,、生物研究等領(lǐng)域提供相關(guān)技術(shù)支持和服務,。
公司自成立以來通過不斷地科技創(chuàng)新，產(chǎn)品研發(fā),，已為客戶提供定制化細胞產(chǎn)品以及完整的細胞培養(yǎng)解決方案,，通過積極地探索、研發(fā),、深化和豐富產(chǎn)品,，目前基礎培養(yǎng)基產(chǎn)品種類多達200多種，細胞系300多種,，原代細胞接近600種,。我們始終以“發(fā)展科學技術(shù),，關(guān)愛公眾生命健康”為動力,，通過技術(shù)創(chuàng)新，廣泛吸納高科技人才,，不斷完善產(chǎn)品體系,、豐富產(chǎn)品鏈，積極拓展市場,，擴充應用領(lǐng)域,，，建立了具有市場競爭力的“語純”品牌,。
注意事項
1,、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套及口罩操作,；
2,、為保持本產(chǎn)品的優(yōu)良使用效果，請務必按照建議的儲存條件進行保存,；
3,、本產(chǎn)品僅供科學研究或進一步生產(chǎn)使用,，不可用于臨床診斷或治療。
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