細菌死活染色試劑盒(DMAO/PI)，即LIVE/DEAD Bacterial Staining Kit with DMAO & PI,，或LIVE/DEAD Bacterial Viability Kit with DMAO and PI,，也稱細菌活力檢測試劑盒(Bacterial Viability Assay Kit)或細菌毒性檢測試劑盒(Bacterial Cytotoxicity Assay Kit)，是一種高效,、便捷,、靈敏的基于DNA綠色熒光染料DMAO和紅色熒光染料碘化丙啶(Propidium iodide, PI)的雙熒光染色法檢測細菌死活的試劑盒。本試劑盒檢測時,，活細菌呈現(xiàn)綠色熒光,，死細菌呈現(xiàn)綠色和紅色兩種熒光,。本試劑盒可使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡,、熒光酶標(biāo)儀,、流式細胞儀等熒光檢測系統(tǒng)進行檢測。

DMAO,，即N, N-dimethylaniline N-oxide,，是一種核酸綠色熒光染料，對于革蘭氏陽性和陰性細菌均適用,，且既能染色活細菌,，也能染色死細菌。該染料具有膜通透性,，能透過細胞膜，優(yōu)先結(jié)合雙鏈DNA,。DMAO非常穩(wěn)定,，在室溫下進行常規(guī)操作和保存不易降解。PI是一種非滲透性熒光染料,，不能穿過具有生物活性的細胞質(zhì)膜,，因此對于具有完整細胞膜的細菌不能染色。而對于壞死細菌,，其細胞膜的完整性喪失,，PI可進入細胞核并與雙鏈DNA結(jié)合，并嵌入細菌的DNA雙螺旋形成PI-DNA復(fù)合物從而產(chǎn)生紅色熒光,，這種結(jié)合很少或幾乎沒有序列偏好,，每4-5個堿基對插入一分子PI染料。將DMAO與PI聯(lián)合使用檢測細菌的死活,，具有完整細胞膜的活細菌呈現(xiàn)綠色熒光,，細胞膜受損的死細菌同時呈現(xiàn)綠色與紅色熒光。

DMAO-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)光波長為503nm,，最大發(fā)射光波長為530nm,；PI-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)光波長為535nm，最大發(fā)射光波長為617nm,。DMAO-DNA和PI-DNA的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考圖1,，可分別使用FITC和Cy3通道觀察。

本試劑盒提供的DMAO與PI均為1000X的儲存液,，溶液經(jīng)過優(yōu)化,，對大多數(shù)細菌都適用，但為了獲得更滿意的結(jié)果,，對于不同類型的細菌請自行進行一定的濃度摸索,，DMAO和PI的使用終濃度一般為0.5-2X，優(yōu)先的推薦終濃度為1X。同時,，本試劑盒提供檢測緩沖液,，該緩沖液可用于細菌死活染色工作液的配制。

保存條件：

-20oC保存,，一年有效,。其中DMAO (1000X)和PI (1000X)須避光保存。

注意事項：

細菌染色前應(yīng)去除培養(yǎng)基,，培養(yǎng)基內(nèi)的組分會結(jié)合DMAO與PI染料,，使染色效率降低。

熒光染料均存在淬滅問題,，請盡量注意避光,，以減緩熒光淬滅。

初次使用時DMAO (1000X)和PI (1000X)可適當(dāng)分裝后-20oC保存,，以避免反復(fù)凍融,。

檢測緩沖液經(jīng)過過濾除菌處理，在使用時須注意避免微生物污染,，否則很可能嚴重影響染色效果,。如果檢測緩沖液發(fā)生渾濁等明顯的微生物污染，就不能繼續(xù)使用,。

熒光酶標(biāo)儀檢測時須使用適合熒光檢測的黑板或白板

注意事項：

本產(chǎn)品僅限科研用途,。