人抗內(nèi)因子抗體（IFA）ELISA試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人抗內(nèi)因子抗體(IFA)水平,。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原,，往包被的微孔中依次加入抗內(nèi)因子抗體(IFA),，再與 HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的抗內(nèi)因子抗體(IFA)呈正相關,。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人抗內(nèi)因子抗體(IFA)濃度,。

試劑盒組成

130 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7終止液6ml×1 瓶

2酶標試劑6ml×1 瓶8標準品（240 ng/L）0.5ml×1 瓶

3酶標包被板12 孔×8 條9標準品稀釋液1.5ml×1 瓶

4樣品稀釋液6ml×1 瓶10說明書1 份

5顯色劑 A 液6ml×1 瓶11封板膜2 張

6顯色劑 B 液6ml×1/瓶12密封袋1 個

操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

120ng/L5 號標準品150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

60ng/L4 號標準品150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

30ng/L3 號標準品150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

15ng/L2 號標準品150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

7.5ng/L1 號標準品150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3,。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9．人抗內(nèi)因子抗體（IFA）ELISA試劑盒不同批號組分不得混用。