用于 qPCR 的不含 ROX 的 GreenMasterMix FAST

規(guī)格：
該實時熒光定量 PCR 預混液為即用型 2 時間預混液，不含 ROX™
,，適用于使用 MIC Cycler 進行 FAST PCR

初始變性時間
短,，針對 2 步法 qPCR
優(yōu)化，等分試樣大?。? mL,。

PCR 引物延伸 多重 PCR 低拷貝靶標 PCR 實時熒光定量 PCR

One unit is defined as the amount of enzyme which will convert 10 nmoles of dNTPs to an acid-insoluble form in 30 min at 72°C under the assay conditions (25 mM TAPS (tris-(hydroxymethyl)-methyl-amino-propanesulfonic acid, sodium salt) pH 9.3 (25°C); 50 mM KCl; 2 mM MgCl2; 1 mM b-mercaptoethanol; and activated calf thymus DNA as substrate.

Sicherheits Hinweise / Safety

Klassifizierungen / Classification

eclass-Nr: 32-16-05-02

技巧

快速 PCR：

在進行快速實時熒光定量 PCR 時，考慮引物設計和靶標大小非常重要,。為了在快速循環(huán)條件下進行高效擴增,，建議靶標大小在 70 bp 至 200 bp 之間。目標長度越短，總運行時間越快,。對于其他靶標和其他引物組,，必須通過實驗確定退火步驟。

請使用以下方案作為靈感,，因為您需要根據(jù)您的目標大小和應用的儀器優(yōu)化儀器設置,。

在 LightCycler® 96 上使用 Genaxxon 預混液（不含 ROX）快速獲得實時 PCR 結果

使用 LighCycler96 （Roche） 使用快速循環(huán)實時 2 步方案對不含 ROX 的 GreenMasterMix （2X） 或不含 ROX 的 ProbeMasterMix （2X） 進行了測試;分別為快速 PAH12 Green LC 和快速 Pthr 探針 LC。
qPCR 設置：使用 GreenMasterMix （2X）（不含 ROX）或 ProbeMasterMix （2X）（不含 ROX）,，靶向 PAH12 （203 bp） 或 Pthr （75 bp） 的引物和 4 種濃度的 gDNA（40 ng,、20 ng、10 ng 和 5 ng）,。所有 DNA 濃度均以四次重復測試,。見圖 1 和圖 2。PCR 反應混合物在 LightCycler® 96 上運行（對 ROX 無要求）,。所應用快速方案的儀器設置,、運行時間和質(zhì)量標準;將 Fast PAH12 Green LC 和 Fast Pthr 探針 LC 與標準方案進行比較;標準 Pthr LC。見表 1.結果

：標準 Fast Pthr 探針 LC 方案的運行時間為 80.8 分鐘,?？焖?PAH12 綠色液相色譜和快速 Pthr 探針液相色譜方案的運行時間分別為 47.5 和 40.8 分鐘。所有協(xié)議時間均包括 samping 時間和 15 分鐘熱啟動,。如表 1 所示,，F(xiàn)ast PAH12 Green LC 和 Fast Pthr Probe LC 方案的確定標準令人滿意。此外,，使用不含 ROX 的 Green 2x 預混液和快速 PAH12 Green 液相色譜方案進行的熔解曲線分析證實了高特異性,。

在 -20°C 下儲存。 僅供實驗室使用,！

上海牧榮生物科技有限公司 是一家專注于分子生物學,、細胞生物學、細菌學,、遺傳學,、免疫學、生物化學,、蛋白質(zhì)學,、細胞治療、臨床應用等領域,，以銷售為主的生物技術公司,。銷售的產(chǎn)品涉及，細胞株和菌株,、胎牛血清,、生化試劑,、ELISA試劑盒、抗體和抗原,、細胞因子,、技術服務、實驗耗材和消耗品,、儀器設備等,。客戶遍布大學,、研究所,、醫(yī)院、衛(wèi)生防疫,、商品檢驗檢疫、制藥公司,、生物技術公司和食品工業(yè)等單位,。

用于 qPCR 的不含 ROX 的 GreenMasterMix FAST