人包蟲病IgM抗體（HD IgM）ELISA試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人包蟲病IgM抗體（HD IgM)表達,。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原，可與樣品中包蟲病IgM抗體（HD IgM)相結合,，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中人包蟲病IgM抗體（HD IgM)的存在與否,。

試劑盒組成

130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

2酶標試劑6ml×1瓶8陽性對照0.5ml×1瓶

3酶標包被板12孔×8條9陰性對照0.5ml×1瓶

4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張  

6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

操作步驟

1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔,、陽性對照2孔,、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。 

7.溫育：操作同3,。

8.洗滌：操作同5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

計算和結果判定

  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為人包蟲病IgM抗體（HD IgM)陰性

  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人包蟲病IgM抗體（HD IgM)陽性,。 

注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用,。

2．人包蟲病IgM抗體（HD IgM）ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。

4．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全,。