牛白細胞介素15（IL-15）ELISA試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛白細胞介素-15（IL-15）水平,。用純化的牛白細胞介素-15（IL-15）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-15（IL-15）,，再與HRP標(biāo)記的白細胞介素-15（IL-15）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素-15（IL-15）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準曲線計算樣品中牛白細胞介素-15（IL-15）濃度。 

試劑盒組成

1      30倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準品（800pg/ml）0.5ml×1瓶

3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準品稀釋液1.5ml×1瓶

4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張  

6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

操作步驟

1.標(biāo)準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

400pg/ml5號標(biāo)準品150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

200pg/ml4號標(biāo)準品150μl的5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

100pg/ml3號標(biāo)準品150μl的4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

50pg/ml2號標(biāo)準品150μl的3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

25pg/ml1號標(biāo)準品150μl的2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、標(biāo)準孔,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,，然后再加待測樣品 10µl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次,，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3,。

8.洗滌：操作同 5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。

計算

以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線,，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準物的濃度與OD 值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標(biāo)準曲線,，最好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標(biāo)準品孔第一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5.封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6.底物請避光保存,。

7.嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9.牛白細胞介素15（IL-15）ELISA試劑盒不同批號組分不得混用,。