牛白蛋白（ALB）ELISA試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個(gè)月

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中牛白蛋白(ALB)水平。用純化的牛白蛋白(ALB) 抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入白蛋白(ALB)，再與 HRP 標(biāo)記的白蛋白(ALB)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)徹-底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的白蛋白(ALB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中牛白蛋白(ALB)濃度,。

試劑盒組成

130 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7終止液6ml×1 瓶

2酶標(biāo)試劑6ml×1 瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（200µg/mL）0.5ml×1 瓶

3酶標(biāo)包被板12 孔×8 條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶

4樣品稀釋液6ml×1 瓶10說(shuō)明書(shū)1 份

5顯色劑A 液6ml×1 瓶11封板膜2 張

6顯色劑 B 液6ml×1/瓶12密封袋1 個(gè)

操作步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

100µg/mL5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

50µg/mL4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

25µg/mL3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

12.5µg/mL2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6.25µg/mL1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,，然后再加待測(cè)樣品 10µl（樣品最終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此重復(fù) 5 次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3,。

8.洗滌：操作同 5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度,。

注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD 值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5.封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6.底物請(qǐng)避光保存。

7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.牛白蛋白（ALB）ELISA試劑盒不同批號(hào)組分不得混用,。