大鼠水通道蛋白13（AQP13）ELISA試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠水通道蛋白13（AQP13）水平。用純化的大鼠水通道蛋白13（AQP13）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入水通道蛋白13（AQP13），再與HRP標記的水通道蛋白13（AQP13）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的水通道蛋白13（AQP13）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中大鼠水通道蛋白13（AQP13）濃度,。 

試劑盒組成

130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

2酶標試劑6ml×1瓶8標準品（400ng/L）0.5ml×1瓶

3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張  

6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

200ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

100ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

50ng/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

25ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

12.5ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．大鼠水通道蛋白13（AQP13）ELISA試劑盒不同批號組分不得混用,。