產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

端粒是位于染色體末端的重復(fù)TTAGGG 序列和核蛋白的復(fù)合物,，在維持細(xì)胞增 殖和保持基因組完整性方面起著至關(guān)重要的作用,。由于端粒區(qū)域復(fù)制不完-全和成體細(xì)胞中端粒酶 TERT 的低活性,，增殖體細(xì)胞中的端粒長(zhǎng)度隨著年齡的增長(zhǎng)而逐漸縮短。端粒長(zhǎng)度的縮短導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯,，細(xì)胞衰老和體細(xì)胞凋亡,。端粒長(zhǎng)度的維持，使癌細(xì)胞逃脫端粒介導(dǎo)的細(xì)胞死亡途徑,，是與癌癥標(biāo)志相關(guān)的一個(gè)特征,。

本產(chǎn)品通過(guò)熒光定量 PCR 技術(shù)，使用 SYBR 綠色熒光染料,，作為 DNA 結(jié)合染料,，和擴(kuò)增子上雙鏈 DNA 的任一小溝結(jié)合，而發(fā)出熒光信號(hào),。根據(jù)每一循環(huán)的熒光強(qiáng)度來(lái)確定擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)量,，并用循環(huán)閾值（threshold cycle；Ct）表示,，由此定量測(cè)定猴端?；驍U(kuò)增產(chǎn)量（Ct）和參考基因 36B4 單拷貝基因擴(kuò)增產(chǎn)量（Ct），與相應(yīng)的端粒長(zhǎng)度和基因拷貝標(biāo)準(zhǔn)曲線,，進(jìn)行對(duì)照測(cè)算,，來(lái)確定猴基因組的端粒長(zhǎng)度。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.操作簡(jiǎn)便易行,。

2.本試劑盒足夠 20 個(gè)樣本的探針?lè)晒舛縋CR 反應(yīng),。

3.本試劑盒運(yùn)用 SYBR 綠色熒光染料作為標(biāo)記信號(hào)。

4.產(chǎn)品即到即用,，性能穩(wěn)定,，無(wú)核酶污染，敏感高效,，定量準(zhǔn)確,，重復(fù)性強(qiáng)。

5.可以被用于動(dòng)物細(xì)胞和組織等樣本端粒長(zhǎng)度的定量檢測(cè),。

6.猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)試劑盒(染料法 qPCR)只能用于科研,，不能用于臨床。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)反應(yīng)液××微升本色管

猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)染色液××微升本色管

猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)端粒液××微升本色管

猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液××微升本色管

猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)端粒引物液××微升本色管

猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)端粒

內(nèi)參引物液××微升本色管

猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)補(bǔ)充液××毫升本色瓶

猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)封隔液××毫升本色瓶

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸,，-20℃避光保存,，有效期半年。

自備試劑

臺(tái)式離心機(jī),，1.5 毫升離心管,，PCR 管，熒光定量PCR 儀 。

使用方法：

一,、標(biāo)準(zhǔn)端粒樣品制備

1.準(zhǔn)備好 7 個(gè)無(wú)菌的 1.5 毫升離心管,，標(biāo)記為T(mén)1 至 T5 號(hào)管

2.按下表分別加入××微升的猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)補(bǔ)充液到 T2 至T5 管。

3.移取××微升猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)端粒液到 T1 號(hào)管,。

4.小心移取××微升 T1 號(hào)管的猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)端粒液到T2 號(hào)管,，混勻。

5.小心移取××微升 T2 號(hào)管稀釋的猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)端粒液到T3 號(hào)管,，混勻,。

6.小心移取××微升 T3 號(hào)管稀釋的猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)端粒液到T4 號(hào)管,，混勻,。

7.以此類推。

8.將 T1 至T5 號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用,；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表

管號(hào)猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)補(bǔ)充液猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)端粒液標(biāo)準(zhǔn)端粒長(zhǎng)度

T1——××微升1.18 × 108Kb

T2××微升××微升 1 號(hào)管1.18 × 107 Kb

T3××微升××微升 2 號(hào)管1.18 × 106 Kb

T4××微升××微升 3 號(hào)管1.18 × 105 Kb T5××微升空白對(duì)照空白對(duì)照

二,、標(biāo)準(zhǔn)參考基因樣品制備

9.準(zhǔn)備好 7 個(gè)無(wú)菌的 1.5 毫升離心管，標(biāo)記為 S1 至 S6 號(hào)管,。

10.按下表分別加入××微升的猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)補(bǔ)充液到 S2 至 S6 管,。

11.移取××微升猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液到 S1 號(hào)管。

12.小心移取××微升 S1 號(hào)管的猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液到 S2 號(hào)管,，混勻,。

13.小心移取××微升 S2 號(hào)管稀釋的猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液到 S3 號(hào)管，混勻,。

14.小心移取××微升 S3 號(hào)管稀釋的猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液到 S4 號(hào)管,，混勻。

15.以此類推,。

16.將 S1 至 S6 號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用,；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表

管號(hào)猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)

補(bǔ)充液猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)

標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液標(biāo)準(zhǔn)參考基因拷貝數(shù)

S1——××微升2.63 ×109 拷貝數(shù)/基因組

S2××微升××微升 1 號(hào)管2.63 ×108 拷貝數(shù)/基因組

S3××微升××微升 2 號(hào)管2.63 ×107 拷貝數(shù)/基因組

S 4××微升××微升 3 號(hào)管2.63 ×106 拷貝數(shù)/基因組

S5××微升××微升 4 號(hào)管2.63 ×105 拷貝數(shù)/基因組

S6××微升空白對(duì)照空白對(duì)照

三、 定量檢測(cè)

17.準(zhǔn)備好純化的待測(cè) DNA 樣品,。

18.進(jìn)行 DNA 定量測(cè)定,。

19.準(zhǔn)備好 PCR 管，并標(biāo)記為標(biāo)準(zhǔn)端粒管,、標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參管,、待測(cè)樣品端粒管、待測(cè)樣品內(nèi)參管,、端粒陰性對(duì)照管和內(nèi)參陰性對(duì)照管,。

20.每管PCR 反應(yīng)總量為 20 微升。

21.分別移取×微升猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)反應(yīng)液到所有管里,。

22.分別加入××微升待測(cè) DNA 模板（總 20 納克）到待測(cè)樣品端粒管和待測(cè)樣品內(nèi)參管里,。

23.分別加入××微升猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)補(bǔ)充液到端粒陰性對(duì)照管和內(nèi)參陰性對(duì)照管里。

24.分別加入4××升上述配制的系列猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)端粒液和猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參液到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)端粒管和標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參管里,。（注意：各選取 4 個(gè)點(diǎn)（105 至 108）即可）

25.分別加入××微升猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)端粒引物液到標(biāo)準(zhǔn)端粒管、待測(cè)樣品端粒管和端粒陰性對(duì)照管里,。

26.分別加入××微升猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)內(nèi)參引物液到標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參管、待測(cè)樣品內(nèi)參管和內(nèi)參陰性對(duì)照管里,。

27.分別加入××微升猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)染色液到所有管里,。

28.分別加入××微升猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)補(bǔ)充液到所有管里。

29.放進(jìn) 4℃微型臺(tái)式離心機(jī)瞬時(shí)離心 5 秒,。

30.使用××微升槍頭分別加入 1 滴猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)封隔液到所有管里,。

31.即刻放進(jìn)熒光定量PCR 儀。

32.熒光定量PCR 反應(yīng)程序?yàn)椤?/p>

溫度（℃）時(shí)間循環(huán)

955 分鐘1

95

60

7230 秒

30 秒

30 秒

40

33.進(jìn)行數(shù)據(jù)分析

（1）采集數(shù)據(jù),，進(jìn)行擴(kuò)增曲線分析,。（退火溫度進(jìn)行熒光信號(hào)采集）

（2）獲得所有樣品的 Ct 值。

（3）分別構(gòu)建端粒長(zhǎng)度和基因組拷貝數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y 軸）為 Ct 值,；橫座標(biāo)（X 軸）,。為對(duì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)端粒長(zhǎng)度（Kb）或?qū)?shù)標(biāo)準(zhǔn)基因組拷貝數(shù)。

（4）根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)端粒長(zhǎng)度（Kb）或基因組拷貝數(shù),。

（5）計(jì)算樣品實(shí)際端粒長(zhǎng)度（Kb）/基因組：

實(shí)際總端粒長(zhǎng)度（Kb）/基因組=樣品總端粒長(zhǎng)度（Kb）÷樣品基因組拷貝數(shù)

選擇我們的猴端粒長(zhǎng)度檢測(cè)試劑盒(染料法 qPCR),，就是選擇精準(zhǔn)、高效,、可靠的檢測(cè)方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！