牛奶源去磷酸化α酪蛋白WAKO

牛奶源去磷酸化α酪蛋白WAKO

磷酸化蛋白分析用——Phos-tag™ 系列產品

Phos-tag™是一種可特異性捕獲磷酸化Ser、Thr,、Tyr等物質的功能分子,，由日本廣島大學大學院醫(yī)齒藥學綜合研究科醫(yī)學品分子機能科學研究室開發(fā)。以Phos-tag™ 丙烯酰胺（Phos-tag™ Acrylamide）為首開發(fā)的多種Phos-tag™ 產品被應用于世界范圍內的基礎研究,，并且在GPCR通路及Wnt通路的信號轉導分析方面也取得了優(yōu)秀成果,。

◆分離磷酸化蛋白！

在制備SDS-PAGE預制膠過程中加入Phos-tag™ Acrylamide,，即可根據磷酸化水平和磷酸化位點分離磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白,。

原理

1. 電泳中的磷酸化蛋白捕獲2個二價金屬離子。

2. 磷酸化水平越高電泳速度越慢,。

3. 根據磷酸化水平進行分離,。（即使磷酸化位點的數(shù)目相同，但只要位置不同就能分離）

特點

●　可檢測市售抗磷酸化抗體無法檢測的磷酸化蛋白,。

●　可檢測磷酸化水平及磷酸化位點,。

●　可同時檢測磷酸化與非磷酸化

Phos-tag™實驗指導手冊，點擊此處查看

從制作Phos-tag™ SDS-PAGE預制膠開始,，Phos-tag™ 相關信息一覽

◆實驗數(shù)據

① α-casein去磷酸化反應隨時間的變化

使用堿性磷酸酶隨時間（孵育時間：0-120 min）處理α-casein（產品編號：038-23221）,，并使用Phos-tag™ SDS-PAGE和常規(guī)SDS-PAGE分離去磷酸化處理的樣品。

② 野生型/突變型Noxa表達的MCL-1磷酸化水平變化

使野生型（wt）及突變型（3E,，KR,，5A）的Noxa在肺小細胞癌細胞株H209細胞中表達，并進行細胞溶質（Cytosol）組分和HM（Heavy Membrane,，含線粒體較多）組分分離,。通過Phos-tag™ SDS-PAGE分離出樣品中的MCL-1（40 kDa）,，使用抗MCL-1抗體進行Western blotting檢測。

【數(shù)據提供】

日本醫(yī)科大學 先進醫(yī)學研究所 基因控制部門 中嶋亙

③ 二維電泳中的應用： hnRNP K異構體的磷酸化分析

通過免疫沉淀法,，從經LPS刺激后的小鼠巨噬細胞J774.1的細胞核提取液中,，分離得到hnRNP K。在二維電泳中,，一維使用IPG膠（pH 4.7-5.9）,，二維使用Phos-tag™ SDS-PAGE，分離hnRNP K的異構體（66 kDa,，64 kDa）,。使用質譜儀可以確認不同的點代表不同的異構體或修飾位點。

【數(shù)據提供】

橫濱市立大學 生命納米系統(tǒng)科學研究科 生物體超分子系統(tǒng)科學專業(yè),，木村彌生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）理化學研究所RCAI 小原收

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◆檢測磷酸化蛋白,！

▌Phos-tag™ Biotin

Phos-tag™ Biotin是Phos-tag™ 分子與結合的產品,，無需使用抗磷酸化抗體即可檢測與PVDF膜上的磷酸化蛋白。

本產品進需配合“HRP 結合親和素”進行使用,。

特點

●　結合與磷酸化種類無關

●　推薦用于檢測無合適的抗磷酸化抗體的蛋白

▌Phos-tag™ 凝膠熒光染料

Phos-tag™ 凝膠熒光染料,，是一種可在生理 pH 范圍內，對凝膠中的磷酸化蛋白進行染色的熒光染料,。進行SDS-PAGE后,，用本產品處理聚丙烯酰胺凝膠，可以對磷酸化蛋白進行特異性染色,。本系列有波長不同的Yellow（黃）,、Magenta（品紅）、Cyan（藍綠）,、Aqua（淺綠）四種顏色,。每管規(guī)格為0.2 mg，可對約20個迷你凝膠進行染色,。

實驗數(shù)據

使用Phos-tag™ 熒光凝膠染色,，篩選zu氨酸激酶抑制劑。結果表明,，激酶抑制劑對磷酸化存在濃度依賴性抑制,。

【數(shù)據提供】

廣島大學大學院 醫(yī)學科學研究科 醫(yī)藥分子機能科學研究室 木下惠美子，木下英司,，小池透

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◆純化磷酸化蛋白,！

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*此產品由Manac Inc.生產并銷售。

◆質譜分析磷酸化蛋白

Phos-tag™ 質譜分析用試劑盒（產品編號：305-93551）通過與MALDI-TOF/MS的樣品進行混合,，即用于磷酸化蛋白的質譜分析,。本產品包含三種不同的分子量的Phos-tag™ 分子,。

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