谷an酸(glutamic acid,，Glu)含量測定試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

Glu 廣泛存在于動物、植物,、微生物和培養(yǎng)細胞中,，不僅是組成蛋白質的 20 種氨基酸之一，而且通過轉氨基作用參與多種氨基酸合成,，是生物體內主要氨基來源之一,。此外，Glu 還是味精的主要有效成分,，常用做食品添加劑以及香料生產,。

測定原理：

利用專用提取液提取，然后用顯色劑進行顯色,，顯色后在 570nm 下進行測定,。

谷an酸含量測定試劑盒 氨基酸系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑二臨用前加入 5ml 蒸餾水充分溶解混勻，用不完的試劑仍 4℃保存,。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀,、臺式離心機、可調式移液器,、微量石英比色皿/96 孔板,、研缽、冰,、蒸餾水,。

谷an酸提取：

1,、細菌或培養(yǎng)細胞樣品：先收集細菌或細胞到離心管內,，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 試劑一）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率 20％或 200W，超聲 3s,，間隔 10s,，重復 30 次）；8000g 常溫離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

2,、組織樣品：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入1ml 試劑一）,，進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

3,、血清（漿）或細胞培養(yǎng)液樣品：按照血清（漿）或細胞培養(yǎng)液體積（ml）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議取 0.1ml 血清（漿）或者細胞培養(yǎng)液加入 1ml 試劑一）,，進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

測定步驟：

1,、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,，調節(jié)波長至 570nm，蒸餾水調零,。

2,、在有蓋EP 管中加入下列試劑：

混勻，90℃水浴 20min（蓋緊,，以防止水分散失）,，流水冷卻，取 200uL 至微量石英比色皿或 96 孔板中,，于 570nm 波長處記錄吸光值A,?！?/span>A=A 測定管-A 對照管,。對照管只要做一管。

谷an酸含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1,、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0074x- 0.5255,；x 為谷an酸含量（µg/ml），y 為吸光值,。

2,、按照血清（漿）或者細胞培養(yǎng)液體積計算

谷an酸含量(μg/ml)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）=1351×(△A+0.5255)

3、按照蛋白濃度計算

谷an酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr

4,、按照樣本質量計算

谷an酸含量(µg/g 鮮重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=135.1×(△A+0.5255) ÷W

5,、按照細菌或細胞密度計算

谷an酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(500×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)

V1：加入反應體系中樣本體積，0.25ml,；V2：加入提取液體積,，1 ml；V3：加入血清（漿）或細胞培養(yǎng)液體積,，0.1 ml,； Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/ml；W：樣本質量,，g,；500：細菌或細胞總數，500 萬,。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

1,、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0037x- 0.5255； x 為谷an酸含量（µg/ml）,，y 為吸光值,。

2、按照血清（漿）或者細胞培養(yǎng)液體積計算

谷an酸含量(μg/ml)= [(△A +0.5255)÷0.0037×V1]÷(V3×V1÷V2）=2703×(△A+0.5255)

3,、按照蛋白濃度計算

谷an酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(V1×Cpr)=270.3×(△A+0.5255) ÷Cpr

4,、按照樣本質量計算

谷an酸含量(µg/g 鮮重)= [(△A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.3×(△A+0.5255) ÷W

5、按照細菌或細胞密度計算

谷an酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(500×V1÷V2)=0.541×(△A+0.5255)

V1：加入反應體系中樣本體積,，0.25ml,；V2：加入提取液體積，1 ml,；V3：加入血清（漿）或細胞培養(yǎng)液體積,，0.1 ml； Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/ml,；W：樣本質量，g,；500：細菌或細胞總數,，500 萬。

注意：

1,、該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷an酸含量測定,，檢測下限為 100µg/ml。

2,、標準曲線線性范圍為：100µg/ml -600µg/ml,。

3、ΔA 線性范圍為：0.01-1,；若大于 1 則需要將上清液用試劑一稀釋至適當倍數后測定,，計算公式中乘以相應稀釋倍數。

谷an酸含量測定試劑盒 氨基酸系列-常備現(xiàn)貨