EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡吸附抑制劑WAKO

EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡吸附抑制劑WAKO

各品牌都將脂質(zhì),、核酸或細(xì)胞膜的熒光標(biāo)記試劑加以改造，使之成為包括外泌體在內(nèi)的細(xì)胞外囊泡的特異熒光標(biāo)記試劑,。該標(biāo)記方法是讓從各個樣品中分離,、提取出來的外泌體樣品與熒光色素進(jìn)行反應(yīng)，通過凝膠過濾或超濾裝置去除未反應(yīng)的熒光色素,。在該熒光標(biāo)記的過程中,，特別是去除未反應(yīng)的熒光標(biāo)記時，會因吸附而損失大量的外泌體樣品,，同時,，通過向外泌體樣品添加FUJIFILM Wako開發(fā)的EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent（下面簡稱EV-Save），能強(qiáng)烈抑制吸附損失（圖1）,。用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS從COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清中分離、提取外泌體樣品,，先用A公司的熒光標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記,，然后用B公司的凝膠過濾柱去除未反應(yīng)色素。將獲得的熒光標(biāo)記外泌體樣品加入HeLa細(xì)胞培養(yǎng)上清中,，經(jīng)過24小時的細(xì)胞吸收后,，用熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀檢測。在熒光色素標(biāo)記時預(yù)先向樣品中加入EV-Save,，結(jié)果顯示,，細(xì)胞內(nèi)的熒光信號比未添加EV-Save時大幅增強(qiáng)（圖1、A, B）,。用PS Capture™ Exosome ELISA Kit后再比較凝膠過濾前后外泌體樣品的吸附損失,， 未添加EV-Save的樣品在凝膠過濾后沒被檢測到外泌體表面標(biāo)記物CD63的信號，而添加了EV-Save的樣品則檢測到了CD63的信號,，所以,，EV-Save能有效抑制凝膠過濾引起的吸附損失（圖1、C）,。

圖1．熒光標(biāo)記外泌體樣品的吸收確認(rèn)與EV-Save抑制吸附損失的效果

用A公司的熒光標(biāo)記試劑對MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS分離的COLO201來源外泌體樣品（1 ×10¹⁰ particles）進(jìn)行標(biāo)記后,，再用熒光顯微鏡（A）和流式細(xì)胞儀（B）確認(rèn)HeLa細(xì)胞吸收外泌體樣品的情況。

準(zhǔn)備同上的外泌體樣品（5 × 10⁹ particles）,，可以用PS Capture™ Exosome ELISA Kit比較CD63信號來檢測凝膠過濾前后的損失（C）,。

通過FUJIFILM Wako PS親和法和超離法從相同量的培養(yǎng)上清樣品中分離、提取出外泌體樣品,，再用A公司的熒光標(biāo)記試劑標(biāo)記外泌體樣品,，進(jìn)行細(xì)胞吸收外泌體的確認(rèn)實驗（圖3）。熒光顯微鏡的分析結(jié)果表明，受體細(xì)胞吸收的由超離法分離,、提取出的外泌體樣品比PS親和提取的外泌體樣品更多（圖3,、A）。但是,，詳細(xì)分析提取外泌體樣品時,，盡管蛋白濃度和粒子數(shù)分析顯示出超離樣品含有更多的外泌體量，但是如果用PS Capture™ Exosome ELISA Kit檢測外泌體標(biāo)記物CD63信號,，PS親和法分離,、提取的樣品比用超離法分離、提取的外泌體樣品的一個粒子的CD63信號和純度更高（圖3,、B）,。使用雜質(zhì)多、污染嚴(yán)重的超離法制備外泌體樣品時,，受體細(xì)胞吸收的信號實體不僅來源于外泌體,，也可能來源于雜質(zhì)蛋白。

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小膠質(zhì)細(xì)胞I bal抗體

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小膠質(zhì)細(xì)胞I bal抗體

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013-26471NA"Anti lb al， Rabbit,， Red Fluorochrome

(635) -conjugated"小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞特異性蛋白抗體（結(jié)合紅色熒光素635）for Immunochemistry 100uL"Application

小膠質(zhì)細(xì)胞I bal抗體

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013-27593NA"Anti Human I bal,， Monoclonal Antibody

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(BAN 50)"抗人β-淀粉樣蛋白,，單克隆抗體（BAN50）for Immunochemistry50uL阿爾茨海默研究用

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Wako"高分子β淀粉樣蛋白寡聚體ELISA試劑盒Wakofor Immunochemistry96 tests阿爾茨海默病研究用,，靈敏度高,，檢測樣品種類多

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