chloramphenicol/OVA 氯霉素偶聯(lián)雞卵白蛋白蛋白

蛋白質(zhì)及多肽合成

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單克隆抗體和多克隆抗體有什么區(qū)別?
抗原上那部分可以引起機(jī)體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu),，叫做抗原決定簇,。一個(gè)抗原上可以有好幾個(gè)不同的抗原決定簇，因而使機(jī)體產(chǎn)生好幾種不同的抗體,，zui終產(chǎn)生出抗體是漿細(xì)胞,。只針對(duì)一個(gè)抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個(gè)純系，純系的英文為Clone,，音譯就是克隆,。
由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,，就象導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面,，即使是同一個(gè)抗原決定簇,，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物,，稱為多克隆抗體,。
單克隆抗體：
　　（monoclonal antibody,，McAb）克隆選擇學(xué)說(shuō)：淋巴細(xì)胞在與抗原接觸前就已經(jīng)存在多種多樣的與抗原專一性結(jié)合的受體,，一種細(xì)胞帶一種受體，進(jìn)入機(jī)體的抗原選擇性的結(jié)合其中的個(gè)別淋巴細(xì)胞,，使之活化,，增殖產(chǎn)生大量帶有同樣受體的細(xì)胞群，分泌同樣的抗體,。當(dāng)抗原進(jìn)入體內(nèi),，在機(jī)體中就會(huì)誘導(dǎo)出針對(duì)不同抗原決定簇的多種抗體，如果要把這些抗體一一分開(kāi),，用現(xiàn)有的生物化學(xué)或物理化學(xué)方法是根本辦不到的,。1975年科勒（Kohler）和米爾斯坦（Milstein）將小鼠免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合,，培養(yǎng)出既能迅速生長(zhǎng)無(wú)限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。從而獲得針對(duì)某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體,。1995年,，Katherine Knight博士在美國(guó)芝加哥Loyola大學(xué)成功地從轉(zhuǎn)基因兔中獲得了骨髓瘤細(xì)胞（Plasmacytoma），開(kāi)創(chuàng)了兔單克隆抗體技術(shù),。與鼠單抗相比,，兔單抗具有：首先，兔抗血清通常含有高親和力抗體,，可以比鼠抗血清識(shí)別更多種類的表位,；其次，兔單克隆抗體能夠識(shí)別許多在小鼠中不產(chǎn)生免疫的抗原,；第三,，由于兔脾臟較大，可以更多進(jìn)行的融合試驗(yàn),，使得高通量篩選融合成為可能,。
抗體的功能：
　　抗體的主要功能是與抗原（包括外來(lái)的和自身的）相結(jié)合，從而有效地清除侵入機(jī)體內(nèi)的微生物,、寄生蟲(chóng)等異物,，抗體（antibody）是一種應(yīng)答抗原產(chǎn)生的、可與抗原特異性結(jié)合的蛋白質(zhì),。每種抗體與特定的抗原決定基結(jié)合,。這種結(jié)合可以使抗原失活，也可能無(wú)效但有時(shí)也會(huì)對(duì)機(jī)體造成病理性損害,，如抗核抗體,、抗雙鏈DNA抗體、抗甲狀腺球蛋白抗體等一些自身抗體的產(chǎn)生,，對(duì)人體可造成危害,。
蛋白質(zhì)與多肽的：
多肽：通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽，它們的分子量低于10,，000Da（Dalton,，道爾頓），能透過(guò)半透膜,，不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀,。也有文獻(xiàn)把由2~10個(gè)氨基酸組成的肽稱為寡肽（小分子肽）；10~50個(gè)氨基酸組成的肽稱為多肽,；由50個(gè)以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì),。
蛋白質(zhì)：生物體中廣泛存在的一類生物大分子，由核酸編碼的α氨基酸之間通過(guò)α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈,，經(jīng)翻譯后加工而生成的具有特定立體結(jié)構(gòu)的,、有活性的大分子,。是α—氨基酸按一定順序結(jié)合形成一條多肽鏈，再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合合而成的高分子化合物,。
就是：都是由20種基本氨基酸通過(guò)肽鍵連接而成的,。
多肽與蛋白質(zhì)的區(qū)別：
　　蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次可簡(jiǎn)寫(xiě)為：C、H,、O,、N等元素→氨基酸→多肽（肽鏈）→蛋白質(zhì)。多肽與蛋白質(zhì)是不同的兩個(gè)層次,，區(qū)別如下：
　?、俣嚯暮偷鞍踪|(zhì)的結(jié)構(gòu)有差異。多肽僅僅是蛋白質(zhì)的初級(jí)結(jié)構(gòu)形式,，而蛋白質(zhì)具有一定的空間結(jié)構(gòu),。蛋白質(zhì)是由多肽和其他物質(zhì)結(jié)合而成的，一個(gè)蛋白質(zhì)分子可由一條肽鏈組成（如高等動(dòng)物的細(xì)胞色素c是由104個(gè)氨基酸殘基的一條肽鏈組成）,，也可由多條肽鏈通過(guò)一定的化學(xué)鍵（肯定不是肽鍵,，如二硫鍵、氫鍵等）連接而成（如胰島素由2條肽鏈組成,、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成,、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等）,。
　?、诙嚯呐c蛋白質(zhì)的功能有差異。多肽往往是無(wú)生物活性,，而蛋白質(zhì)是具有生物活性的,。多肽一般無(wú)活性（如蛋白質(zhì)在胃、小腸中經(jīng)消化產(chǎn)生的多肽）,，少數(shù)有活性（如抗利尿激素就是多肽類激素），與蛋白質(zhì)相比,，多肽的分子量較小,，沒(méi)有空間結(jié)構(gòu)，一般無(wú)活性,；蛋白質(zhì)的分子量較大,，有空間結(jié)構(gòu)，有活性（變性后活性下降或消失,，活性消失叫做失活）
　　因此,，一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實(shí)際上不能稱為蛋白質(zhì)。
多肽合成：
是一個(gè)重復(fù)添加氨基酸的過(guò)程,，固相合成順序一般從C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成,。過(guò)去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法,。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來(lái)，經(jīng)過(guò)不斷的改進(jìn)和完善,，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù),，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點(diǎn)，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度,。多肽合成總的來(lái)說(shuō)分成兩種：固相合成和液相多肽合成,。
抗體的效價(jià)鑒定：
不管是用于診斷還是用于治療，制備抗體的目的都是要求較高效價(jià),。不同的抗原制備的抗體,，要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多,，包括有試管凝集反應(yīng),、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等,。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,，以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),，一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來(lái)鑒定,。