E.G7-OVA 小鼠 T 淋巴瘤細(xì)胞

E.G7-OVA 小鼠 T 淋巴瘤細(xì)胞

E.G7-Ova

細(xì)胞鑒定種屬鑒定

細(xì)胞來(lái)源國(guó)家資源庫(kù)

細(xì)胞背景來(lái)源于 C57BL/ 6（H-2 b）小鼠淋巴瘤細(xì)胞系 EL4（見(jiàn) BCRC 60179）,，EL4 細(xì)胞通過(guò)電穿孔轉(zhuǎn)染質(zhì)粒 pAc-neo-OVA,，質(zhì)粒 pAc-neo-OVA 攜帶雞卵清蛋白（OVA）mRNA 和新霉素（G418）抗性基因的完整 拷貝;E.G7-OVA 細(xì)胞含有插入質(zhì)粒的單個(gè)拷貝，并組成性地合成和分泌 OVA;用 E.G57-OVA 細(xì)胞免疫的 C6BL/ 7 小鼠產(chǎn)生對(duì) OVA 2-258 肽特異性的 H-276 Kb 限制性細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞;該細(xì)胞系是研究小鼠細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞主要組織相容性復(fù)合體（MHC）I 類(lèi)限制反應(yīng)的模型系統(tǒng),。

細(xì)胞特性形態(tài)：淋巴母細(xì)胞,，懸浮生長(zhǎng)

用途：僅供科研使用。

培養(yǎng)條件1）準(zhǔn)備 1640 培養(yǎng)基與 2 mM L-谷氨酰胺調(diào)整為含有 1.5 g/ L 碳酸氫鈉，4.5 g/ L 葡萄糖,，10 mM HEPES 和 1.0 mM 丙酮酸鈉,，并添加 0.05 mM 2-Mercaptoethanol和 0.4 mg/ ml G418，90%;胎牛血清,，10%,。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5% 。 溫度：37 攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%,。

注意事項(xiàng)常溫發(fā)貨：收到后 T25 瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置 2-3 小時(shí)后觀察密度和狀態(tài)拍照 2-3 張反饋給銷(xiāo)售， 密度達(dá)標(biāo)就可以傳代,。前期傳代比例 1:2 ,，等再次長(zhǎng)滿后傳代時(shí)建議凍存其中一整瓶成 1 個(gè) 1ml 凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代,，反復(fù)凍存 2-3 只后才擴(kuò)增做實(shí)驗(yàn),，以防突發(fā)情況引起斷種。

干冰發(fā)貨：常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管 2 只,，復(fù)蘇 1 只,，另外一只備用，第一個(gè)復(fù)蘇不成功時(shí)嚴(yán)格按照廠家要求復(fù)蘇第二個(gè),，均沒(méi)有復(fù)蘇成功的情況即時(shí)留存復(fù)蘇照片通知銷(xiāo)售,。

貼壁細(xì)胞參考：

1.  棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。

2.  加入 0.25％（w / v ）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL）,，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 3-5min ,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。將 細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養(yǎng)皿中,，添加 6-8ml 按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2~1:5 的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存:  收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用,。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。

懸浮細(xì)胞參考：

懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞,，可以通過(guò)向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),，一般情況下 細(xì)胞密度維持在 1×105~1×106 個(gè)/mL（不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同，）可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng),。如 需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中 1000rpm ,，離心 5min ，棄去上清,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后重 懸混勻后將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中,，添加 6-8ml 按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2~1:4 的比例進(jìn)行,。

細(xì)胞培養(yǎng)：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含 4-6mL 培養(yǎng)基的離心管 中混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 3-5min ,，棄去上清液,，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸 液加入含 6-8ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中 37℃培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 70%-90% ，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞,，可以通過(guò)向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),，一般情況下 細(xì)胞密度維持在 1×105~1×106 個(gè)/mL（不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同，）可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng),。如 需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中 1000rpm ,，離心 5min ，棄去上清,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后重 懸混勻后將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中,，添加 6-8ml 按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2~1:5 的比例進(jìn)行,。

3） 細(xì)胞凍存:  收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用,。

運(yùn)輸形式： 低溫：1mL 凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80 度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。

常溫: T25 瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

生物安全： 1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套,、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏,，并會(huì)慢慢充滿液氮,。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害,。

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