DC2.4 小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞

細(xì)胞特性

種屬: 小鼠（Mus musculus）

品系： C57BL/6

組織來(lái)源: 骨髓（Bone marrow）

細(xì)胞形態(tài)： 樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendritic cell）

生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)（Adherent）

含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞背景：

樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）是免疫系統(tǒng)的抗原呈遞細(xì)胞，存在于大多數(shù)組織中,，特別是那些與外部環(huán)境接觸的組織（例如,，皮膚和鼻子，肺,，胃和腸的內(nèi)壁）,。DCs于1973年描述，其主要功能之一是吞噬外來(lái)病原體并將加工后的抗原呈遞給幼稚T細(xì)胞以調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫反應(yīng),。DC還表達(dá)Toll樣受體,，并有助于調(diào)節(jié)先天免疫反應(yīng)。盡管它們分布在大多數(shù)組織中,，但DC在體內(nèi)數(shù)量很少,，并且在體外難以維持,。這些困難限制了樹(shù)突狀細(xì)胞的研究。DC2.4 是通過(guò)轉(zhuǎn)導(dǎo) C57BL/6 小鼠的骨髓分離株而創(chuàng)建的永生化鼠樹(shù)突狀細(xì)胞,，具有表達(dá)鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞 CSF （GM-CSF） 和 myc 和 raf 癌基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,。DC2.4表現(xiàn)出樹(shù)突狀細(xì)胞的特征，包括細(xì)胞形態(tài)和樹(shù)突狀細(xì)胞特異性標(biāo)志物的表達(dá),，以及在MHC I類(lèi)和II類(lèi)分子上吞噬和呈遞外源抗原的能力,。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。               

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）  RPMI-1640培養(yǎng)基＋10% FBS優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10ng/ml murineGM-CSF＋1%P/S雙抗

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

DC2.4 小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞